Chtěli bychom se s vámi podělit o shrnutí 2. ročníku odborného edukačního semináře LCMS SHIMADZU na PřF UK](https://lcms.cz/events/435), který byl plný zajímavých diskuzí, praktických cvičení v laboratořích a užitečných informací.
Během třech dnů jsme se společně tématicky zaměřili na HPLC a LC/MS systémy na bázi kvadrupolů a probírali jsme klíčové koncepty, teorii a praxi v této oblasti. Prezentace kolegů z PřF UK byly plné cenných informací a věříme, že Vás inspirovaly i k hlubšímu zamyšlení nad principy a procesy v oblasti těchto analytických technik.
Diskuze a cvičení, které probíhaly během semináře, byly živé a plné zajímavých otázek a názorů a doufáme, že jste si odnesli nové poznatky a inspiraci, kterou budete moci využít ve své kařdodenní činnosti.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Uvod_do_HPLC_Petr_Kozlik_Pr_F_UK_2_4d7c7332df/Shimadzu-Uvod-do-HPLC-(Petr-Kozlik-PrF-UK)-2.jpg" alt="Shimadzu: Úvod do HPLC (Petr Kozlík, PřF UK)"/>
Pokud máte další otázky ohledně semináře, materiálů, dalších školení nebo kurzů, neváhejte nás kontaktovat.
Zároveň bychom Vás tímto velmi rádi již nyní pozvali na chystaný hardwarový seminář, který bude zaměřen na téma: základní uživatelská údržba a správná praxe s HPLC systémy. Bude se tedy jednat o více detailní a proktický seminář určený především SHIMADZU uživatelům.
Pokud o tento seminář již nyní jevíte zájem, neváhejte nám napsat a prozatím Vás nezávazně zapíšeme do našeho seznamu úřastníků. Plánovaný termín tohoto semináře je leden/únor 2024.
Děkujeme za váš zájem a těšíme se na další spolupráci a další podobné události.
Za celý Shimadzu tým,
Mgr. Ondrej Hillmich (Business specialist, ondrej.hillmich@shimadzu.eu.com , +420 734 246 627)
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Workshop_Petr_Kozlik_a_Tomas_Krizek_Pr_F_UK_2_17688673ee/Shimadzu-Workshop-(Petr-Kozlik-a-Tomas-Krizek-PrF-UK)-2.jpg" alt="Shimadzu: Workshop (Petr Kozlík a Tomáš Křížek, PřF UK)"/>
<h3>Co jste se mohli naučit v teoretické části?</h3>
<h4><a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=27&amp;mainauthorItems=1&amp;search=fundamentals">Úvod do HPLC</a></h4>
<ul>
<li>Petr Kozlík (PřF UK)
</li>
<li>Chromatografie
<ul>
<li>MICHAIL SEMJOVIČ CVĚT</li>
<li>Arne Wilhelm Kaurin Tiselius</li>
<li>Archer John Porter Martin a Richard Laurence Millington Synge</li>
<li>Csaba Horváth</li>
</ul>
</li>
<li>Chromatogram
</li>
<li>Rozlišení píků
</li>
<li>Symetrie píků
</li>
<li>Teorie chromatografického patra
</li>
<li>Výškový ekvivalent teoretického patra
</li>
<li>Van Deemterova rovnice
</li>
<li>Mimokolonové příspěvky k rozšiřování zón
</li>
<li>HPLC vs. UHPLC
</li>
<li>Isokratická a gradientová eluce
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Uvod_do_HPLC_Petr_Kozlik_Pr_F_UK_00f0cbc2e7/Shimadzu-Uvod-do-HPLC-(Petr-Kozlik-PrF-UK).jpg" alt="Shimadzu: Úvod do HPLC (Petr Kozlík, PřF UK)"/>
<h4>Separační systémy LC a stacionární fáze dostupné na trhu</h4>
<ul>
<li>Petr Kozlík (PřF UK)
</li>
<li>Systém s normálními fázemi (NP-HPLC)
</li>
<li>Systém s reverzními fázemi (RP-HPLC)
</li>
<li>Iontově výměnná chromatografie
</li>
<li>Iontově párová chromatografie
</li>
<li>Hydrofilní interakční kapalinová chromatografie ((HILIC))
</li>
<li>Hydrofóbní interakční kapalinová chromatografie
</li>
<li>Micelární kapalinová chromatografie
</li>
<li>Afinitní chromatografie
</li>
<li>Molekulová vylučovací chromatografie
</li>
<li>Chirální chromatografie
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Separacni_systemy_LC_a_stacionarni_faze_dostupne_na_trhu_Petr_Kozlik_Pr_F_UK_848793f31e/Shimadzu-Separacni-systemy-LC-a-stacionarni-faze-dostupne-na-trhu-(Petr-Kozlik-PrF-UK).jpg" alt="Shimadzu - Separační systémy LC a stacionární fáze dostupné na trhu (Petr Kozlík, PřF UK).jpg"/>
<h4>Praktické aspekty HPLC a <a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=27&amp;mainauthorItems=1&amp;search=method+development">vývoj HPLC metody</a></h4>
<ul>
<li>Petr Kozlík (PřF UK)
</li>
<li>Udržet HPLC systém v dobrém stavu
</li>
<li>Minimalizace finančních nákladu na opravu HPLC
</li>
<li>Ušetřit čas při řešení problému
</li>
<li>Porozumění činnosti HPLC
</li>
<li>Vývoj chromatografické metody
<ul>
<li>Definování cíle metody</li>
<li>Informace o vzorku</li>
<li>Výběr vhodného detektoru</li>
<li>Výběr LC metody</li>
<li>Prvotní experimenty se standardy</li>
<li>Reálné vzorky; úprava vzorku</li>
<li>Finální optimalizace a řešení problémů</li>
<li>Validace metody</li>
</ul>
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Prakticke_aspekty_HPLC_a_vyvoj_HPLC_metody_Petr_Kozlik_Pr_F_UK_cdddc81db1/Shimadzu-Prakticke-aspekty-HPLC-a-vyvoj-HPLC-metody-(Petr-Kozlik-PrF-UK).jpg" alt="Shimadzu: Praktické aspekty HPLC a vývoj HPLC metody (Petr Kozlík, PřF UK)"/>
<h4><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=1&amp;search=troubleshooting">„Troubleshooting“</a> a trendy v HPLC</h4>
<ul>
<li>Petr Kozlík (PřF UK)
</li>
<li>Zvýšení účinnosti a selektivity separace
</li>
<li>Rychlá separace
</li>
<li>Zelená chemie
</li>
<li>Citlivost
</li>
</ul>
<h5>Běžně se vyskytující problémy</h5>
<ul>
<li>Problém s tlakem – nižší, vyšší, kolísající</li>
<li>Problém se základní linií – šum, drift, cyklický průběh</li>
<li>Problémy retenčního času – fluktuace retenčního času</li>
<li>Problém s chromatografickým píkem – žádný pík, dvojitý pík, nesymetrický pík</li>
<li>Problém s chromatogramem – negativní píky, jíný počet píků</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Troubleshooting_a_trendy_v_HPLC_Petr_Kozlik_Pr_F_UK_f62e306564/Shimadzu-Troubleshooting-a-trendy-v-HPLC-(Petr-Kozlik-PrF-UK).jpg" alt="Shimadzu: Troubleshooting a trendy v HPLC (Petr Kozlík, PřF UK)"/>
<h4><a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=31&amp;mainauthorItems=1&amp;search=fundamentals">Spojení LC-MS</a> (úvod do MS – ionizační zdroje, analyzátory)</h4>
<ul>
<li>Petr Kozlík (PřF UK)
</li>
<li>Ionty v MS
</li>
<li>Rozlišení MS
</li>
<li>Kalibrace instrumentu
</li>
<li>Iontový zdroj
<ul>
<li>Elektronová ionizace (EI)</li>
<li>Ionizace za atmosférického tlaku</li>
<li>Chemická za atmosférického tlaku (APCI)</li>
</ul>
</li>
</ul>
<h5>Hmotnostní analyzátory</h5>
<ul>
<li>Kvadrupólový analyzátor</li>
<li>Průletový analyzátor</li>
<li>Iontová past</li>
<li>Magnetický sektorový analyzátor</li>
<li>Orbitrap</li>
<li>Iontová cyklotronová resonance</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Jak_hledat_ty_spravne_informace_od_Shimadzu_Portaly_Lab_Rulez_Nejvetsi_on_line_zdroj_informaci_v_oblasti_analyticke_chemie_Ivo_Novotny_Lab_Rulez_78ed6d90ad/Shimadzu-Jak-hledat-ty-spravne-informace-od-Shimadzu-Portaly-LabRulez-Nejvetsi-on-line-zdroj-informaci-v-oblasti-analyticke-chemie-(Ivo-Novotny-LabRulez).jpg" alt="Shimadzu: Jak hledat ty správné informace od Shimadzu - Portály LabRulez - Největší on-line zdroj informací v oblasti analytické chemie (Ivo Novotný, LabRulez)"/>
<h4><a href="https://lcms.cz/products?instrumentationItems=35&amp;manufacturerItems=1">LC-QqQ</a></h4>
<ul>
<li>Petr Kozlík (PřF UK)
</li>
<li>Full scan
</li>
<li>SIM
</li>
<li>Sken produktových iontů
</li>
<li>Sken prekurzorových iontů
</li>
<li>Sken neutrálních ztrát
</li>
<li>SRM
</li>
<li>Volba LC-MS (QqQ) podmínek
</li>
<li>Kvantifikace pomoci LC-QqQ
</li>
<li>Nalezení vhodných MRM přechodů
</li>
<li>LC/MS rady a tipy
</li>
<li>Kontaminace a snížení odezvy analytů
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_SICRIT_iontovy_zdroj_Nova_dimenze_v_LCMS_Jan_Bucek_Plasmion_16a761f423/Shimadzu-SICRIT-iontovy-zdroj-Nova-dimenze-v-LCMS-(Jan-Bucek-Plasmion).jpg" alt="Shimadzu:- SICRIT iontový zdroj – Nová dimenze v LCMS (Jan Buček, Plasmion)"/>

Jaký byl odborný seminář HPLC a kvadrupólové LC/MS od Shimadzu na PřF UK

Toto video jsme vytvořili jako úvod pro techniku HPLC. Má poskytnout první představu o tom, co je to „vysokoúčinná kapalinová chromatografie“ (HPLC) a jaké jsou její možné aplikace. HPLC je definována jako „laboratorní technika separace směsi, při níž kapalná mobilní fáze přenáší analyt přes kolonu držící stacionární fázi“. To - podle mě - nechává některé otázky otevřené, např. jaká směs, jaký analyt, co je mobilní fáze, kolona, stacionární fáze?Na úvod se naučme několik základních pojmů:<ul><li>Analyt: Například jídlo a pití nebo jakýkoli druh léku - Směs jednotlivých složek, které je třeba oddělit a jednotlivě změřit.</li><li>Kolona (neboli separační kolona) je klíčový spotřební materiál při chromatografických separacích. LC kolonu lze popsat jako trubku - většinou vyrobenou z nerezové oceli, která drží „stacionární fázi“ mezi dvěma kovovými fritami a koncovkami, které umožňují instalaci v systému HPLC.</li><li>Mobilní fáze: Mobilní fáze v HPLC je kapalina, která přenáší analyt přes separační kolonu.</li><li>Stacionární fáze: Chemická vazba na malé částice, které vyplňují tělo kolony. Stacionární fáze je místem, kde dochází k separaci na základě rozdílných tendencí sloučenin k interakci s ní, což vede k rozdílné rychlosti pohybu kolonou a způsobuje separaci látek.</li></ul><figure class="image"><img style="aspect-ratio:606/107;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Getting_started_Figure_1_Typical_set_up_of_HPLC_instrumentation_84c8fdb370.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Začínáme - Obrázek 1 Typické uspořádání HPLC instrumentace" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Getting_started_Figure_1_Typical_set_up_of_HPLC_instrumentation_84c8fdb370.jpg 245w," sizes="100vw" width="606" height="107"></figure>Jakmile se analyt nesený mobilní fází oddělí v koloně se stacionární fází, vhodný detektor rozpozná analyt vystupující z kolony a vytvoří signálový pík v grafu zvaném chromatogram.Typické schéma systému HPLC a jeho jednotlivých složek je vidět na obrázku 1, zatímco obrázek 2 znázorňuje proces separace na koloně naplněné stacionární fází.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Getting_started_Figure_2_Schematic_representation_of_a_liquid_chromatographic_separation_of_two_compounds_f817ccdf48.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Začínáme - Obrázek 2 Schematické znázornění separace dvou sloučenin pomocí kapalinové chromatografie" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Getting_started_Figure_2_Schematic_representation_of_a_liquid_chromatographic_separation_of_two_compounds_f817ccdf48.jpg 245w," sizes="100vw" width="1488" height="943">Jako příklad aplikace kapalinové chromatografie uveďme <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=1&amp;search=beverages">nápoje</a>. Nápoje (např. voda, džus, nealkoholický nápoj, káva, pivo, víno) obsahují vodu, cukr, vitamíny, kofein, alkohol a další složky - žádoucí i nežádoucí. Ty nežádoucí se nazývají kontaminanty, které mohou být škodlivé.Jednou z nejčastějších aplikací HPLC je zajištění kvality výrobků - tedy bezpečnosti spotřebitelů. Aby bylo možné určit přesné množství každé jednotlivé složky - ať už jde o vitamin, cukr nebo pesticid - je třeba je od sebe oddělit a po oddělení HPLC usnadňuje identifikaci a kvantifikaci každé jednotlivé složky, aby bylo zajištěno správné složení složek, nepřítomnost nežádoucí kontaminace a kvalita výrobku.Chceme vědět, co v něm je, a v ideálním případě také, kolik toho je přítomno. Cílem je separace a termínem pro měření separace v chromatografii je rozlišení. Rozlišení je důležité a bude tématem dalšího článku.&nbsp;<blockquote><h5>Edukativní HPLC a LC/MS webinaře Shimadzu</h5><ul><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2299">Introducing Shimadzu's Analytical Intelligence in AQbD Method Development</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/4568">Chromatography Unleashed: Elevate Your Chiral and Achiral Separations</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/547">Shimadzu's LC Method Development (RP) Series - Session 1: Method Screening</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2495">MALDI-Imaging For All: A Researcher’s Guide</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/3378">Analytical Technologies for COVID-19 Challenges: Drug Repurposing | Vaccine Research | PPE &amp; Material Testing | Environmental Monitoring</a></li></ul></blockquote><h4>Výběr literatury Shimadzu se zaměřením na základy a principy HPLC a LC/MS <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=1&amp;search=basics+fundumentals">v knihovně LabRulezLCMS</a></h4><ul><li>Back to Basics - Explaining Resolution (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Gradient Retention Factor, K* (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Dispersion - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>RF-20A Fluorescence Detector Basics and Applications (Technické články | 2010)</li><li>Back to Basics - Gradient Anatomy - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>The Very Basics of IMAGEREVEAL MS - With differential analysis as an example (Prezentace)&nbsp;</li><li>Back to Basics - Pump Linearity and Dwell Volume Measurements - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>Improving the Yield of Basic Amino Acids in a Protein Sequencer (Aplikace | 2023)</li><li>SFC Basic Guide - Shimadzu Supercritical Fluid Chromatograph (Příručky | 2021)</li><li>Rewriting the Book on Supercritical Fluid Chromatography (Technické články | 2024)</li></ul>

Shimadzu HPLC Blog: Začínáme

Dnes si povíme něco o rozlišení (R). Přesná identifikace a kvantifikace jednotlivých sloučenin je možná pouze tehdy, když příslušné píky v chromatogramu vystupují z kolony s určitým odstupem. Tento prostor mezi píky se nazývá rozlišení. Cílem chromatografické separace je odpovídající rozlišení složek, které nás zajímají, v přiměřeném časovém rámci.Rs lze vypočítat s přihlédnutím k rozdílům v retenci a šířce elučních píků. Čím větší je rozdíl v retenčním čase (tR) a čím menší je šířka píku, tím širší je rozlišení. Tenké píky budou obecně lépe rozlišeny od sousedních píků než široké pásy, jak je znázorněno na obrázku 1.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Zakladni_teorie_Obrazek_1_Znazorneni_vlivu_retence_a_sirky_piku_na_rozliseni_e4a240b0d1.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Základní teorie - Obrázek 1 Znázornění vlivu retence a šířky píku na rozlišení" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Zakladni_teorie_Obrazek_1_Znazorneni_vlivu_retence_a_sirky_piku_na_rozliseni_e4a240b0d1.jpg 245w," sizes="100vw" width="2698" height="1409">Než však budeme pokračovat, je dobré seznámit se s několika základními pojmy, se kterými se budeme setkávat i později:<ul><li>Základní linie: Čára, která je vidět na chromatogramu, když není detekována žádná sloučenina - základní linie odráží nulový signál.</li><li>Separace na základní linii: Graf se vrací k nule, dotýká se základní linie, než vystoupá k dalšímu maximu píku.</li><li>Chromatogram: Vizuální výstup separačního systému - různé píky na chromatogramu odpovídají různým složkám separované směsi (obrázek 2).</li><li>Eluce: proces migrace sloučeniny přes kolonu nesenou mobilní fází.</li><li>Retenční čas (tR): Doba, za kterou určitý analyt projde systémem za stanovených podmínek. Nazývá se retenční, protože stacionární fáze sloučeninu zadržuje.</li><li>Rozlišení (Rs): Měřítko separace dvou píků v chromatogramu - na základě rozdílů v retenci a šířce píku.</li></ul>Existují různé způsoby výpočtu rozlišení - žádným z nich se zatím nebudeme zabývat. O způsobu dosažení rozlišení a vzorcích pro jeho výpočet budeme hovořit, až se dostaneme k vývoji a optimalizaci metody. Jedním ze základních požadavků na cestě k separaci je však to, aby sloučeniny, které nás zajímají, vykazovaly retenci na stacionární fázi. Pokud analyt neinteraguje se stacionární fází kolony, pak celý vzorek projde kolonou a všechny jeho složky dopadnou na detektor současně, tudíž nedojde k separaci. Prvním důležitým krokem je tedy nastavení systému, ve kterém se budou sloučeniny na koloně zadržovat. Existují různé mechanismy, které nabízejí retenci pro různé vzorky, které představíme jako další téma. Dnes se ještě jednou podíváme na chromatogram, protože je důležité pochopit vizuální výstup - výsledek naší LC separace.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Zakladni_teorie_Obrazek_2_Ukazka_HPLC_chromatogramu_68911ed8d4.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Základní teorie - Obrázek 2 Ukázka HPLC chromatogramu" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Zakladni_teorie_Obrazek_2_Ukazka_HPLC_chromatogramu_68911ed8d4.jpg 245w," sizes="100vw" width="4103" height="2475">Chromatogram je dvourozměrný graf, kde osa Y představuje intenzitu signálu detektoru a osa X čas analýzy. Odezva detektoru se vztahuje ke koncentraci cílové sloučeniny v elučním píku.tR - neboli retenční čas - označuje časový interval mezi nadávkováním vzorku a vrcholem jeho píku. Na druhé straně doba, kterou potřebuje nezadržená látka k cestě přes kolonu k detektoru, se nazývá mrtvý čas a vyjadřuje se jako t0. Pouze pokud je tR větší než t0, znamená to, že pík vykazuje známky interakce se stacionární fází. Pokud sloučeniny eluují při t0, je třeba separační systém upravit tak, aby se zvýšila retence. Obecně platí, že za stejných podmínek bude analyt vždy vykazovat stejný retenční čas, a proto lze tR použít k identifikaci píku.Podívejme se na příklad (obrázek 3): Standardní roztok kofeinu je analyzován pomocí HPLC, výsledkem je jeden pík sloučeniny v čase pět minut. V následném experimentu je stejným způsobem analyzován zředěný vzorek čaje, jehož výsledkem je chromatogram s několika píky. Mezi těmito signály je jeden eluující v retenčním čase přibližně 5 min, stejném jako u standardu kofeinu. Tento pík lze považovat za kofein, identifikovaný na základě LC retence. Dále lze plochu pod křivkou píku použít k výpočtu koncentrace cílové sloučeniny.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Gesa_Schad_Product_Manager_at_Shimadzu_Europa_Gmb_H_My_LC_Blog_Zakladni_teorie_b357bf75f0.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Základní teorie - Obrázek 3 Srovnání chromatogramu standardu kofeinu a vzorku zředěného čaje s vyznačeným píkem kofeinu" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Gesa_Schad_Product_Manager_at_Shimadzu_Europa_Gmb_H_My_LC_Blog_Zakladni_teorie_b357bf75f0.jpg 245w," sizes="100vw" width="2079" height="1107">V dalším díle našeho Shimadzu HPLC blogu se můžete těšit na příklady různých separačních režimů v HPLC.<blockquote><h5>Edukativní HPLC a LC/MS webinaře Shimadzu</h5><ul><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2299">Introducing Shimadzu's Analytical Intelligence in AQbD Method Development</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/4568">Chromatography Unleashed: Elevate Your Chiral and Achiral Separations</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/547">Shimadzu's LC Method Development (RP) Series - Session 1: Method Screening</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2495">MALDI-Imaging For All: A Researcher’s Guide</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/3378">Analytical Technologies for COVID-19 Challenges: Drug Repurposing | Vaccine Research | PPE &amp; Material Testing | Environmental Monitoring</a></li></ul></blockquote><h4>Výběr literatury Shimadzu se zaměřením na základy a principy HPLC a LC/MS <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=1&amp;search=basics+fundumentals">v knihovně LabRulezLCMS</a></h4><ul><li>Back to Basics - Explaining Resolution (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Gradient Retention Factor, K* (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Dispersion - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>RF-20A Fluorescence Detector Basics and Applications (Technické články | 2010)</li><li>Back to Basics - Gradient Anatomy - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>The Very Basics of IMAGEREVEAL MS - With differential analysis as an example (Prezentace)&nbsp;</li><li>Back to Basics - Pump Linearity and Dwell Volume Measurements - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>Improving the Yield of Basic Amino Acids in a Protein Sequencer (Aplikace | 2023)</li><li>SFC Basic Guide - Shimadzu Supercritical Fluid Chromatograph (Příručky | 2021)</li><li>Rewriting the Book on Supercritical Fluid Chromatography (Technické články | 2024)</li></ul>

Shimadzu HPLC Blog: Základní teorie

Navážeme na minulý díl (Shimadzu HPLC Blog: Základní teorie) a probereme, jak dosáhnout retence cílových sloučenin ve stacionární fázi. Rozhodujícími parametry, které je třeba zvážit, jsou kombinace mobilní fáze a stacionární fáze. Sloučeniny, které se raději zdržují v mobilní fázi, budou kolonou postupovat rychleji než ty, které budou pravděpodobně silně interagovat se stacionární fází. Pouze sloučeniny, které vykazují určitou přitažlivost ke zvolené separační koloně, v ní budou zadrženy.&nbsp;Pro začátek je třeba mít představu o chemických vlastnostech daného vzorku a podle toho zvolit vhodný separační systém. Různá uspořádání LC systému jsou znázorněny v tabulce 1.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Separacni_mody_Tabulka_1_Zakladni_separacni_mody_v_HPLC_5b539aef78.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Separační módy - Tabulka 1 Základní separační módy v HPLC" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Separacni_mody_Tabulka_1_Zakladni_separacni_mody_v_HPLC_5b539aef78.jpg 245w," sizes="100vw" width="1600" height="648">V praxi se naprostá většina aplikací HPLC provádí v režimu reverzní fáze s použitím kolony C18 - což bude podrobněji vysvětleno v dalším článku - ale i ostatní jsou neméně důležité a neměly by zůstat nezmíněny. Pro lepší pochopení budou v následujícím textu vysvětleny některé pojmy podrobněji.<h3>Chromatografie na Normální fázi</h3><ul><li>Literatura Shimadzu zaměřená na <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=27&amp;mainauthorItems=1">HPLC v knihovně LabRulezLCMS</a></li></ul>V režimu kapalinové chromatografie "na normální fázi" se používá polární stacionární fáze a mobilní fáze s nízkou polaritou pro separaci nízko až středně polárních sloučenin, které se snadno rozpouštějí v organických rozpouštědlech (tj. vzorků, které jsou nerozpustné ve vodných roztocích). Separace je založena na rozdílech v polaritě, zatímco pro analýzu sloučenin s malými rozdíly v hydrofobicitě je nevhodná. Typickými stacionárními fázemi používanými v LC na normální fázi jsou např. oxid křemičitý nebo fáze s malými polárními funkčními skupinami, jako jsou amino, diol nebo kyano vázané na povrch oxidu křemičitého. Mobilními fázemi jsou nepolární rozpouštědla, např. n-hexan nebo ethylacetát. Grafické znázornění retenčního chování v LC na normální fázi je znázorněno níže.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Separacni_mody_Obrazek_1_Retence_analytu_v_chromatografii_na_normalni_fazi_02aaf230ae.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Separační módy - Obrázek 1 Retence analytu v chromatografii na normální fázi" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Separacni_mody_Obrazek_1_Retence_analytu_v_chromatografii_na_normalni_fazi_02aaf230ae.jpg 245w," sizes="100vw" width="1600" height="725"><ul><li>Polarita: Fyzikální vlastnost sloučeniny, která určuje stupeň interakce s mobilní a stacionární fází při separaci na normální a reverzní fázi HPLC.</li><li>Polární sloučenina: nebo-li „hydrofilní“, což v překladu znamená „s afinitou k vodě“ nebo „milující vodu“. Zjednodušeně řečeno - polární sloučenina se rozpouští ve vodě a silně interaguje s polární stacionární fází.</li><li>Nepolární sloučenina: nebo-li „hydrofobní“ je jinými slovy „odpuzující vodu“ nebo „nesnášející vodu“, jako například olej. Nepolární sloučeniny se ve vodě nerozpouštějí a přilnou k nepolárním stacionárním fázím.</li></ul><h3>Iontová chromatografie (IC)</h3><ul><li>Literatura Shimadzu zaměřená na <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=28&amp;mainauthorItems=1">Iontovou chromatografii v knihovně LabRulezLCMS</a></li></ul>Jinými slovy „iontově výměnná chromatografie“ (IEC) je určena ke stanovení látek nesoucích náboj, ať už anorganických nebo organických iontů. Příkladem mohou být peptidy, proteiny, organické kyseliny nebo protonované báze. Iontově výměnná stacionární fáze se skládá z iontových skupin, které jsou vázány na nosič, zatímco mobilní fází je obvykle vodný pufrový systém s upraveným pH. Retence je řízena pH a iontovou silou mobilní fáze. K separaci dochází prostřednictvím výměnných rovnováh mezi analyty v roztoku a ionty eluentu, které interagují s nabitým povrchem stacionární fáze. Obrázek 2 ukazuje schéma tohoto mechanismu pro aniontové (záporně nabité) sloučeniny. Vyšší koncentrace iontů v mobilní fázi má za následek rychlejší eluci rozpuštěného iontu prostřednictvím konkurence.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Separacni_mody_Obrazek_2_Retencni_mechanismus_v_iontove_chromatografii_364dbf919f.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Separační módy - Obrázek 2 Retenční mechanismus v iontové chromatografii" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Separacni_mody_Obrazek_2_Retencni_mechanismus_v_iontove_chromatografii_364dbf919f.jpg 245w," sizes="100vw" width="1600" height="428"><ul><li>pH: míra kyselosti nebo zásaditosti vodného roztoku. Stupnice se pohybuje od 1 (kyselý) do 14 (zásaditý). Změny pH ovlivňují chromatografickou retenci.</li><li>Pufr: Roztoky pufru - tedy vodné roztoky slabé kyseliny a její soli (např. kyselina mravenčí + mravenčanový iont) jsou běžně používané mobilní fáze, protože mohou odolávat změnám pH při přidání malého množství kyselin nebo zásad, což vede ke stabilním LC podmínkám.</li><li>Iontová síla: Koncentrace iontů v roztoku, přičemž ion znamená kladně nebo záporně nabitý atom nebo molekulu.</li></ul><h3>Vylučovací chromatografie (SEC)</h3><ul><li>Literatura Shimadzu zaměřená na <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=42&amp;mainauthorItems=1">GPC/SEC v knihovně LabRulezLCMS</a></li></ul>SEC se používá pro vzorky, které obsahují vysokomolekulární sloučeniny a jejichž složky se výrazně liší molekulovou velikostí. Lze ji například použít k separaci proteinů s různou velikostí, přičemž jako mobilní fáze se používají vodné pufry s téměř neutrálním pH, aby se zachovala biologická aktivita proteinů. Další typickou aplikací je stanovení distribuce molekulových hmotností polymerů, kde se typicky jedná o tzv. gelovou permeační chromatografii (GPC) - zde se jako eluent používají organická rozpouštědla při zvýšené teplotě, aby se polymery rozpustily. Retence je určena především velikostí pórů stacionární fáze, nikoliv vlastnostmi mobilní fáze. Molekuly malých rozměrů vstupují hluboko do pórů, což způsobuje, že se po koloně pohybují mnohem pomaleji než molekuly větších rozměrů, které se do pórů nevejdou (nebo jen částečně). Výsledkem je pořadí eluce z kolony podle velikosti, přičemž velké sloučeniny &nbsp;vycházejí z kolony jako první, zatímco malé molekuly jsou zadržovány déle. Vizualizace tohoto principu je na obrázku 3.<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Separacni_mody_Obrazek_3_Princip_separace_ve_vylucovaci_chromatografii_df8c2d56b1.jpg" alt="Shimadzu/Gesa Schad: Shimadzu HPLC Blog: Separační módy - Obrázek 3 Princip separace ve vylučovací chromatografii" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_Gesa_Schad_Shimadzu_HPLC_Blog_Separacni_mody_Obrazek_3_Princip_separace_ve_vylucovaci_chromatografii_df8c2d56b1.jpg 245w," sizes="100vw" width="1369" height="426">Vzhledem k tomu, že chromatografie na reverzní fázi se používá v naprosté většině aplikací HPLC, bude jí věnován další příspěvek na blogu.<blockquote><h5>Edukativní HPLC a LC/MS webinaře Shimadzu</h5><ul><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2299">Introducing Shimadzu's Analytical Intelligence in AQbD Method Development</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/4568">Chromatography Unleashed: Elevate Your Chiral and Achiral Separations</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/547">Shimadzu's LC Method Development (RP) Series - Session 1: Method Screening</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2495">MALDI-Imaging For All: A Researcher’s Guide</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/3378">Analytical Technologies for COVID-19 Challenges: Drug Repurposing | Vaccine Research | PPE &amp; Material Testing | Environmental Monitoring</a></li></ul></blockquote><h4>Výběr literatury Shimadzu se zaměřením na základy a principy HPLC a LC/MS <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=1&amp;search=basics+fundumentals">v knihovně LabRulezLCMS</a></h4><ul><li>Back to Basics - Explaining Resolution (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Gradient Retention Factor, K* (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Dispersion - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>RF-20A Fluorescence Detector Basics and Applications (Technické články | 2010)</li><li>Back to Basics - Gradient Anatomy - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>The Very Basics of IMAGEREVEAL MS - With differential analysis as an example (Prezentace)&nbsp;</li><li>Back to Basics - Pump Linearity and Dwell Volume Measurements - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>Improving the Yield of Basic Amino Acids in a Protein Sequencer (Aplikace | 2023)</li><li>SFC Basic Guide - Shimadzu Supercritical Fluid Chromatograph (Příručky | 2021)</li><li>Rewriting the Book on Supercritical Fluid Chromatography (Technické články | 2024)</li></ul>

Shimadzu HPLC Blog: Separační módy

<blockquote><h4>V minulých dílech Shimadzu HPLC Blogu jsme probrali tato témata:</h4><ul><li>Díl 01: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5002">Začínáme</a></li><li>Díl 02: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5022">Základní teorie</a></li><li>Díl 03: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5023">Separační módy</a></li><li>Díl 04: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5100">Chromatografie na reverzních fázích</a></li><li>Díl 05: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5141">Izokratická vs. Gradientová eluce</a></li><li>Díl 06: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5202">Anatomie HPLC instrumentace</a></li><li>Díl 07: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5244">Detektory</a></li><li>Díl 08: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5255">LCMS detektor</a></li><li>Díl 09: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5311">Rovnice rozlišení</a></li><li>Díl 10: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5330">Účinnost kolony</a></li><li>Díl 11: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5373">Retenční faktor (k)</a></li><li>Díl 12: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5388">Selektivita (α)</a></li><li>Díl 13: <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/article/5444">Pufr - Část první</a></li></ul></blockquote>Výběr správného pufru a pH pro mobilní fázi je jedna věc, ale při práci s pufrovanou mobilní fází v HPLC nebo UHPLC analýze je třeba zohlednit a dbát ještě na několik dalších věcí. Pro zjednodušení jsme pro Vás připravili přehled nejdůležitějších bodů:<ul><li>Také v HPLC je kvalita výstupu určena kvalitou vstupu. Proto by všechna použitá rozpouštědla měla být alespoň v HPLC nebo MS kvalitě, aby nedošlo ke kontaminaci, která by mohla vést k falešným píkům nebo blokádám v systému. K přípravě vodných rozpouštědel, jako jsou pufrovací roztoky, by měla být vždy použita ultračistá voda.</li><li>Speciální bezpečnostní uzávěry (obrázek 1) jsou dobrým řešením pro ochranu mobilní fáze před kontaminací a ztrátou rozpouštědla v důsledku odpařování. Uzavírají lahve a zároveň zajišťují bezpečný odtok HPLC rozpouštědel přes nasazené kapiláry. K zakrytí lahví s mobilní fází NESMÍ být použita fólie nebo parafilm, protože nezajišťují vzduchotěsné uzavření a mohou vést k extrakci látek, které se mohou do rozpouštědla vyluhovat.</li></ul><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_1_Spravny_a_nespravny_x_zpusob_uzavreni_lahve_s_mobilni_fazi_dce5b0c8ee.jpg" alt="Shimadzu HPLC Blog: Obrázek 1: Správný (√) a nesprávný (x) způsob uzavření láhve s mobilní fází" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_1_Spravny_a_nespravny_x_zpusob_uzavreni_lahve_s_mobilni_fazi_dce5b0c8ee.jpg 245w," sizes="100vw" width="1945" height="998"><ul><li>V ideálním případě by měly být pufry připraveny čerstvě v den použití. Ujistěte se, že roztok je čirý, homogenní a neobsahuje nerozpuštěné částice, v případě potřeby jej přefiltrujte přes filtr 0,45 µm. V případě, že jsou pufrovací roztoky skladovány, před použitím v systému se ujistěte, že jsou stále použitelné, protože mají omezenou životnost.&nbsp;</li><li>Většina pufrů poskytuje ideální podmínky pro růst mikroorganismů. Pufrovací roztok, který je delší dobu uchováván při pokojové teplotě, se zakalí, což signalizuje růst mikroorganismů. Tyto kontaminanty mohou způsobit řadu problémů, jako je ucpání systému, znečištění zpětných ventilů a chromatografické interference. Proto je třeba v praxi dodržovat některá preventivní opatření:</li></ul><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_2_Preventivni_opatreni_k_zabraneni_rustu_mikroorganismu_v_pufrech_pro_HPLC_eaa04c6623.jpg" alt="Shimadzu HPLC Blog: Obrázek 2: Preventivní opatření k zabránění růstu mikroorganismů v pufrech pro HPLC" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_2_Preventivni_opatreni_k_zabraneni_rustu_mikroorganismu_v_pufrech_pro_HPLC_eaa04c6623.jpg 245w," sizes="100vw" width="1488" height="950"><ul><li>Je nutné zkontrolovat nastavené pH PŘED přidáním jakéhokoli organického rozpouštědla. Před měřením se ujistěte, že je pH metr přesně kalibrován. Ačkoli to není doporučeno, pokud se rozhodnete měřit pH v láhvi s mobilní fází, předem vyčistěte sondu, aby nedošlo ke kontaminaci.</li><li>Těsnění a jiné smáčené části mohou být poškozeny vysokým obsahem solí a/nebo extrémními hodnotami pH. Pro prodloužení životnosti pístu a těsnění je vhodné použít zadní proplach těsnění (obvykle 10–20 % v/v IPA ve vodě) k odstranění všech potenciálně škodlivých zbytků mobilní fáze.</li><li>Rozpustnost pufru je důležitým bodem, který je třeba zohlednit, a závisí na typu pufru, koncentraci, pH a typu použitého organického rozpouštědla. V ideálním případě by sůl měla být zcela rozpustná ve vodě a je třeba dbát na to, aby během gradientové analýzy nedošlo k vysrážení, když se vodný roztok smíchá s organickým rozpouštědlem. Nejlepší je směs předem otestovat, aby se zajistilo, že zůstane v roztoku, protože nerozpustné krystaly se mohou hromadit a způsobit ucpání přístroje. Před experimentem lze provést jednoduchý test smícháním různých částí pufru a organického rozpouštědla ve zkumavce, jak je znázorněno na obrázku 3. Pokud se směs zakalí, sůl není rozpustná v tomto složení mobilní fáze.</li></ul><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_3_Test_rozpustnosti_pufru_ve_smesi_mobilni_faze_92e8dbbd19.jpg" alt="Shimadzu HPLC Blog: Obrázek 3: Test rozpustnosti pufru ve směsi mobilní fáze" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_3_Test_rozpustnosti_pufru_ve_smesi_mobilni_faze_92e8dbbd19.jpg 245w," sizes="100vw" width="2232" height="893"><ul><li>Při použití pufru pH, kyseliny nebo zásady pouze v mobilní fázi A, se v gradientové analýze iontová síla mobilní fáze snižuje s rostoucím množstvím organického rozpouštědla (mobilní fáze B). Přidání stejné koncentrace pufru, kyseliny nebo zásady také do organického rozpouštědla (mobilní fáze B) může tomuto jevu zabránit a minimalizovat problémy se sklonem základní linie, gradienty pH a iontové síly a zlepšit linearitu pro nabité sloučeniny, jak je znázorněno na obrázku 4.</li></ul><img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_4_vliv_iontove_sily_d8b5c6f09e.jpg" alt="Shimadzu HPLC Blog: Obrázek 4: Vliv proměnné iontové síly na základní linii v gradientové analýze bazických sloučenin" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Shimadzu_HPLC_Blog_Obrazek_4_vliv_iontove_sily_d8b5c6f09e.jpg 241w," sizes="100vw" width="1488" height="966">Mnoho problémů, které se vyskytují během HPLC nebo UHPLC analýzy, lze připsat kvalitě mobilní fáze nebo ucpání kapilár v důsledku částic zavlečených při dodávce rozpouštědla. Proto je vhodné věnovat pozornost správným postupům při výběru a přípravě rozpouštědel, aby se předešlo trvalým problémům v pozdější fázi. V některém z dalších příspěvků se budeme věnovat radám pro řešení problémů a vysvětlíme si, jak postupovat, pokud se tyto problémy přesto vyskytnou. V příštím článku se však blíže podíváme na stacionární fázi.<blockquote><h5>Edukativní HPLC a LC/MS webinaře Shimadzu</h5><ul><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2299">Introducing Shimadzu's Analytical Intelligence in AQbD Method Development</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/4568">Chromatography Unleashed: Elevate Your Chiral and Achiral Separations</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/547">Shimadzu's LC Method Development (RP) Series - Session 1: Method Screening</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/2495">MALDI-Imaging For All: A Researcher’s Guide</a></li><li><a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.labrulez.com/webinar/3378">Analytical Technologies for COVID-19 Challenges: Drug Repurposing | Vaccine Research | PPE &amp; Material Testing | Environmental Monitoring</a></li></ul></blockquote><h4>Výběr literatury Shimadzu se zaměřením na základy a principy HPLC a LC/MS <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=1&amp;search=basics+fundumentals">v knihovně LabRulezLCMS</a></h4><ul><li>Back to Basics - Explaining Resolution (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Gradient Retention Factor, K* (Technické články | 2020)</li><li>Back to Basics - Dispersion - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>RF-20A Fluorescence Detector Basics and Applications (Technické články | 2010)</li><li>Back to Basics - Gradient Anatomy - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>The Very Basics of IMAGEREVEAL MS - With differential analysis as an example (Prezentace)&nbsp;</li><li>Back to Basics - Pump Linearity and Dwell Volume Measurements - Protocols for LC Instruments (Technické články | 2020)</li><li>Improving the Yield of Basic Amino Acids in a Protein Sequencer (Aplikace | 2023)</li><li>SFC Basic Guide - Shimadzu Supercritical Fluid Chromatograph (Příručky | 2021)</li><li>Rewriting the Book on Supercritical Fluid Chromatography (Technické články | 2024)</li></ul>

Shimadzu HPLC Blog: Pufr - Část druhá

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Naším posláním je šířit informace o produktech firmy Shimadzu v oblasti instrumentálních analytických přístrojů, přístrojů pro testování materiálů a speciálních přístrojů pro life science, jejich prodej a následně - instalace, zaškolení, záruční a pozáruční servis, ověřování a validace a aplikační podpora.

Shimadzu HPLC Blog: Pufr - Část druhá

Shimadzu HPLC Blog: Separační módy

Shimadzu HPLC Blog: Základní teorie

Shimadzu HPLC Blog: Začínáme

Jaký byl odborný seminář HPLC a kvadrupólové LC/MS od Shimadzu na PřF UK

Nejbližší akce

Shimadzu at ISC 2026

ISC 2026 - the 35th International Symposium on Chromatography

Odběry vzorků 2026

Webináře

Spatial Imaging Series: More Than Mass Spec

PFAS Asia Summit 2026

Unknowns Uncovered: Smart LC Strategies That Work