Doporučené postupy pro používání HPLC systému Agilent - odplyňovače a čerpadla

V prvním díle série o postupech a doporučeních k práci s HPLC systémy Agilent Technologies jsme se blíže podívali na základní pravidla, práci s rozpouštědly, přípravou a úpravou vzorků před analýzou nebo jak HPLC systém propláchnout. Zdůraznili jsme pak denní a týdenní úkoly a co provést při zapnutí a vypnutí Vašeho kapalinového chromatografu.

Doporučení pro odplynovače/degaséry

VAROVÁNÍ: Kapalina uvnitř degaséru

V případě kondenzace rozpouštědel s nízkým bodem varu nebo v případě netěsnosti se může uvnitř komor odplyňovače hromadit kapalina, což by narušilo výkon.

Když k tomu dojde:

• Propláchněte všechny kanály rozpouštědla izopropanolem.
• Nepoužívané kanály ponechte naplněny izopropanolem.

• Zkontrolujte kompatibilitu rozpouštědel s odplynovačem a aplikací
  • Pro RI aplikace používejte samostatné standardní degaséry (G1322A nebo G7122A), s průtoky vyššími než 5 mL/min, s rozpouštědly s nízkým bodem varu (<60 °C) a s hexanem, tetrahydrofuranem a jakýmikoliv halogenovanými rozpouštědly.
  • Pro všechny ostatní aplikace použijte integrovaný nebo samostatný vysoce výkonný degasér (G4225A).

HPST: 1260 Infinity II Degasser/Odplyňovač mobilní fáze

• Pokud nelze dosáhnout nebo udržet dostatečný podtlak pro optimální výkon odplynění (jak je indikováno žlutou nebo červenou stavovou kontrolkou LED na samostatných odplyňovačích nebo specifickými chybovými zprávami na integrovaných odplyňovačích), modul vypněte a zapněte.
• Pokud po vypnutí a opětovném zapnutí napájení nelze dosáhnout nebo udržet podtlak na integrovaných odplyňovacích systémech, použijte Evacuation Mode, který je k dispozici na obrazovce ovládání přístroje systému v Agilent Lab Advisor.

HPST: Řízení odplynovačů v software Agilent LabAdvisor

POZNÁMKA: Při zahájení Evacuation Mode postupujte podle příslušných pokynů.

Doporučení pro čerpadla

• Pravidelně kontrolujte výkon čerpadla sledováním signálu tlaku.
• Preventivní údržbu provádějte v doporučených intervalech.
• Připravte čerpadlo podle doporučení v kapitole popisující proces zapínání čím zajistite jeho optimální výkon a maximální životnost.
• Při výměně rozpouštědel zajistěte, aby nové rozpouštědlo bylo mísitelné s předchozím rozpouštědlem (v případě potřeby použijte jako mezikrok další mísitelné rozpouštědlo).
• Použijte funkci oplach těsnění, podle doporučení, čím zajistěte optimální výkon a maximální životnost, viz „Oplach těsnění“ níže.

💡 Článek: TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: HPLC – Vysokoúčinná kapalinová chromatografie – základy a principy

Doporučení pro čerpadla s MCGV

Výberte kanál vícekanálového gradientového ventilu (MCGV)

• Pro roztoky pufrů použijte dolní kanály (A a D).
• Pro odstranení případných usazenin solí všechny kanály MCGV pravidelně proplachujte 200 mL vody.
• Kontrolujte kompatibilitu pufrů a organických rozpouštědel, abyste zabránili vysrážení v směšovací komoře MCGV.

POZNÁMKA: Při míchání nekompatibilních rozpouštědel může docházet ke srážení soli v místě míchání a k následné blokaci průtokové cesty a poškození dílů.

Oplach těsnění (používání je povinné, pokud je modul nainstalován)

• Oplach těsnění (G4204A, G4220A, všechna čerpadla 1260)

VAROVÁNÍ: Kontaminace rozpouštědla pro oplach těsnění. Poškození pístů a těsnění.

• Rozpouštědla pro oplach těsnění nerecyklujte.
• Rozpouštědlo pro oplach těsnění vyměňujte jednou týdně.
• Typická spotřeba rozpouštědla: 0,5 L týdně.
• Důrazně se doporučuje použití sady láhví pro oplach těsnění (5067-6131).

Použití funkce oplach těsnění je povinné při používání pufrů a dalších netěkavých rozpouštědel nebo přísad, které se mohou usazovat na pístech a těsněních. Funkce oplachování těsnění pravidelně a automaticky tyto části čistí.

Výhody používání Oplachu těsnění:

• Odstranování částic, krystalů solí a dalších netěkavých zbytků z pístů a těsnění (mohou poškodit píst a těsnení pístu)
• Mazání třecích ploch těsnění/píst
• Chlazení pístů

Nastavení oplachu těsnění ve vašem CDS software

Nastavení naleznete na obrazovce ovládání; doporučuje se používat nastavení zobrazená na obrázku níže.

Uvědomte si, že:

• Nastavení oplachu těsnění NESPADÁ pod parametry metody (protože nastavení ovládání přístroje jsou aplikována na všechny metody používané v konkrétním přístroji).
• Oplach těsnění musí být znovu manuálně zapnut po následujících úkonech:
  • pokud byla smazána CHYBOVÁ hláška
  • Zapnutí.

💡 Článek a záznam přednášky: Předcházejte problémům v HPLC s využitím příslušenství Agilent

Funkce a provoz oplachu těsnění:

• PRAVIDELNÝ provoz, například 0,5 min každých 7 min.

  • Nastavení lze změnit na obrazovce ovládání, viz níže.
  • Nastavení jsou přístupná prostřednictvím kontextového menu, viz níže.
  • Typická hodnota průtoku rozpouštědla je 0,7 mL/min. To odpovídá přibližné spotřebě 3 mL/h nebo 0,5 l/týden při konstantním provozu.

• Použijte

  • 10 % izopropanolu ve vodě.
  • 100 % izopropanol pro aplikace s normálními fázemi.

• Umístěte láhev s rozpouštědlem pro oplach nad chromatografem a láhev s odpadem pod chromatografem.

• Nikdy láhev s rozpouštědlem pro oplach nedoplňujte. Vždy používejte řádně vyčištěné a nové láhve.

• U čerpadel, která nejsou vybavena senzorem oplachu těsnění, proveďte test peristaltického čerpadla.

  • Dotkněte se peristaltického čerpadla prstem a zkontrolujte, zda toto čerpadlo správně funguje, nebo zkontrolujte průtok rozpouštědla oplachu těsnění pohledem na rozpouštědlo kapající z hadičky.

HPST: Tabulka 1 - Dialogové okno pro oplach těsnění a provoz

Oplachování těsnění (G7104A, G7104C, G7120A a G7132A)

VAROVÁNÍ: Kontaminace rozpouštědla pro oplach těsnění. Poškození pístů a těsnění.

• Rozpouštědla pro oplach těsnění nerecyklujte.
• Rozpouštědlo pro oplach těsnění vyměňujte jednou týdně.
• Typická spotřeba rozpouštědla: 0,5 L týdně.
• Důrazně se doporučuje použití sady láhví pro oplach těsnění (5067-6131).

Čerpadlo pro oplachování těsnění pracuje nejen tehdy, když běří analytická metoda, ale také v pohotovostním stavu nebo ve stavu není připraveno.

Funkce oplach těsnění pravidelně automaticky čistí písty a těsnění od usazenin.

Senzor oplachu těsnění bude provádět neustálou kontrolu výkonnosti systému oplachu těsnění. V případě výskytu anomálie bude senzor informovat uživatele.

Funkce a provoz oplachu těsnění:

• Interval oplachu těsnění je nastaven na 30 s každých 7 min.

• Průtok je nastaven na 500 μL/min.

• Integrita systému k oplachování těsnění je kontrolována v pravidelných intervalech.

• Běžná spotřeba rozpouštědla pro oplach je asi 0,5 L za týden.

• Použijte

  • 10 % izopropanolu ve vodě.
  • 100 % izopropanol pro aplikace s normálními fázemi.

• Umístěte láhev s rozpouštědlem pro oplach nad chromatografem a láhev s odpadem pod chromatografem.

• Nikdy láhev s rozpouštědlem pro oplach nedoplňujte. Vždy používejte řádně vyčištěné a nové láhve.

• NERECYKLUJTE lahve určené pro rozpouštědla k oplachování těsnění.

• Pokud senzor oplachu detekuje nějaké nesrovnalosti, bude EMF symbol svítit žlutě.

  • Vyměňte rozpouštědlo pro oplach těsnění a spusťte funkci oplachu těsnění prostřednictvím kontextového menu
  • Zkontrolujte hadičky oplachu těsnění a filtr, zaměřte se na prakliny, netěsnosti nebo ucpání.
  • Zkontrolujte případné úcpání u hadičky pro odpad. Zkontrolujte, zda odpadní rozpouštědlo volně odtéká:
    • Pokud se odpadní rozpouštědlo usazuje v hadičce, nemůže snímač správně fungovat

HPST: Kontextové menu

Výběr literatury na téma řešení problémů a údržba HPLC systému Agilent v knihovně LabRulezLCMS

• Preventive and Routine Maintenance for Your HPLC System (Prezentace | 2022)

• Get Your LC Back Up and Running After the Shut Down (Příručky | 2020)

• HPLC Troubleshooting Fundamentals (Prezentace | 2021)

• Top 10 HPLC Method Development Fails (Prezentace | 2022)

• Don’t Lose It: Troubleshooting Separation Changes (Prezentace | 2020)

• From HPLC Instrument to Column - Tracking Down the HPLC Problem (Prezentace | 2022)

• The Chromatography Checklist (Prezentace | 2018)

• Surviving Chromatography - Part 1: Preventive Action (Prezentace | 2019)

• Surviving Chromatography - Part 2: Corrective Action (Prezentace | 2018)

• LC Troubleshooting Guide - Your guide to solving common problems and staying productive (Postery | 2019)

• HPLC Column Troubleshooting: Is It Really The Column? (Prezentace | 2010)

• The Chromatography Detective: Troubleshooting Tips & Tools for LC & LCMS (Prezentace | 2018)

• All About LC Connections –What to Do to Make A Great One - HPLC educational webinar: Becoming a better chromatographer (Prezentace | 2021)

• It’s Not All About the Column: The Role of the Mobile Phase and Your Instrument (Prezentace | 2021)

• Tips and Tricks of HPLC System Troubleshooting (Prezentace | 2005)

• Maximize Performance and Minimize Maintenance with Genuine Agilent LC Spares (Technické články | 2015)

• Hydrophilic Interaction Chromatography Method Development and Troubleshooting (Technické články | 2018)

• Why Did That Happen? (Prezentace | 2021)

• Around the LC System in 45 Slides (Prezentace | 2016)

• Taking the Trouble Out of TroubleshootingIs It the Column, Method, or Instrument (Prezentace | 2016)