Agilent AdvanceBio Peptide Plus Columns

Význam tématu

Analýza peptidů hraje zásadní roli ve vývoji a kontrole kvality bioléčiv, zejména při monitoringu jejich struktury, stability a přítomnosti nečistot. Charged surface C18 sloupce se ukazují jako inovativní nástroj pro zlepšení rozlišení a reprodukovatelnosti chromatografických analýz peptidů, a to při použití běžných MS-­přátelských přísad, jako je kyselina mravenčí.

Cíle a přehled studie / článku

• Prezentovat vlastnosti nových Agilent AdvanceBio Peptide Plus sloupců pro LC/MS analýzu peptidů.
• Ukázat jejich výhody oproti tradičním C18 sloupcům v podmínkách s kyselinou mravenčí.
• Ilustrovat zlepšení rozlišení post-translačních modifikací a impurit.
• Popsat možnost vysoké zátěže vzorku a robustnost metody pro QA/QC.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda je založena na reverzní fázi s hybridním endcap C18 materiálem s nabitou povrchovou úpravou (Charged Surface), využívající 2,7 µm částice s pórem 100 Å. Mobilní fáze s 0,1 % kyselinou mravenčí umožňuje přímé spojení s MS detekcí.

Instrumentace:

• Agilent AdvanceBio Peptide Plus kolony (2,1×150 mm a další rozměry).
• Agilent AdvanceBio LC/Q-TOF 6545XT systém.
• Agilent MassHunter softwarové nástroje pro zpracování LC/MS dat.
• Agilent OpenLab a MatchCompare pro chromatografickou analýzu.
• Automatizační platforma Agilent AssayMAP Bravo pro přípravu vzorků.

Hlavní výsledky a diskuse

• Zlepšení rozlišení deamidovaných peptidů od nemodifikovaných s výrazně ostrými a symetrickými vrcholy.
• Vynikající oddělení syntetických peptidových impurit v jediném LC/MS separačním běhu.
• Udržení úzkých tvarů vrcholů a stabilních retencí i při vysokých zatíženích až 30 µg vzorku.
• Alternativní selektivita umožňující lepší rozlišení kritických párů peptidů než tradiční C18.
• Robustní výroba a QC procesy zajišťují konstantní kvalitu sloupců z šarže na šarži.

Přínosy a praktické využití metody

• Zrychlení vývoje biofármacie díky univerzálnímu použití jedné kolony od raných fází až po QA/QC.
• Jednoduchá přenositelnost metody mezi různými LC platformami.
• Snížení nákladů a času díky eliminaci potřeby výměny mobilních fází nebo redevelopu metod.
• Možnost citlivé detekce minoritních komponent, včetně peptidů z hostitelských buněk.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší integrace těchto sloupců do multidimenzionálních LC/MS postupů a v rámci automatizovaných workflow pro vysokopropustné charakterizace proteomů. Další vývoj může přinést úpravy stationární fáze pro selektivnější detekci specifických modifikací.

Závěr

Agilent AdvanceBio Peptide Plus sloupce představují významný krok vpřed v LC/MS analýze peptidů. Díky nabitému povrchu, kompatibilitě s kyselinou mravenčí a robustní výrobě nabízejí vynikající rozlišení, reprodukovatelnost a univerzálnost použití v bioléčivech. Jejich implementace zefektivňuje vývoj, validaci a rutinní kontrolu kvality terapeutických proteinů a peptidů.

Reference

Žádné uvedené literární citace.