AdvanceBio Peptide Plus - Peptide Characterization

Význam tématu

Analýza peptidů a jejich modifikací je klíčová v biotechnologickém a farmaceutickém průmyslu pro přesné určení struktury, čistoty a kvantity bioterapeutik a syntetických peptidů. Optimalizované separační techniky podporují spolehlivou detekci nízkonukleových příměsí a posttranslačních modifikací (PTM), jako je deamidace či oxidace.

Cíle a přehled článku

Cílem dokumentu je představit nové chromatografické kolony AdvanceBio Peptide Plus s hybridní stacionární fází s nabitou povrchovou úpravou na částicích Poroshell 120 (2,7 µm) a demonstrovat jejich výhody při separaci peptidů za použití formiové kyseliny jako přísady mobilní fáze. Studie porovnává výkon s konvenčními C18 kolunami a mapuje vliv na rozlišení kritických párů peptidů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byly použity UHPLC systémy vybavené kolónami AdvanceBio Peptide Plus (2,1×150 mm, Poroshell 120, 2,7 µm). Mobilní fáze obsahovala 0,1 % formiové kyseliny ve vodě (Eluent A) a 0,1 % formiové kyseliny v acetonitrilu (Eluent B). Analytické podmínky:

• Teplota kolony: 60 °C
• Průtok: 0,4 ml/min
• Gradient: např. 3→30→95 % B v čase 0–22–24 min
• Detekce: UV (214 nm) a hmotnostní spektrometrie (ESI-MS)

Hlavní výsledky a diskuse

Kolony AdvanceBio Peptide Plus ukázaly:

• Lepší tvar píků a vyšší citlivost v MS detekci při použití formiové kyseliny ve srovnání s tradičními C18.
• Vynikající symetrie píků a stabilní retence i při vysokém naložení vzorku, což umožňuje analyzovat nízkoúrovňové nečistoty.
• Změnu selektivity pro kritické páry, zejména deamidované peptidy, které se elučně oddělují s lepším rozlišením než na standardních C18.

Přitom portování metod z mapovacích kol lze provést zjednodušeně snížením počátečního % organické fáze o 5–10 %.

Přínosy a praktické využití metody

AdvanceBio Peptide Plus:

• Umožňuje univerzální metodu pro UV i MS detekci bez nutnosti měnit pufrovou podmínku (formaic acid).
• Podporuje rychlé zavedení metody od vývojové fáze k rutinní kvantifikaci.
• Zlepšuje rozlišení klíčových PTM v QA/QC prostředí i v rámci vývojových laboratoří.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření využití nabitých povrchových fází v peptidové analytice pro komplexní profilování PTM a glykanů. Integrace s vysoce výkonnými MS platformami povede k hlubší charakterizaci proteomických vzorků a podporuje vývoj nových bioterapeutik. Dále se předpokládá optimalizace gradientních programů pro zachycení malých hydrofilních peptidů.

Závěr

AdvanceBio Peptide Plus kolony kombinují vysokou účinnost s unikátní selektivitou nabité povrchové C18 fáze. Výrazně zlepšují rozlišení kritických párů a citlivost při LC-MS analýze, přičemž umožňují vysoké hmotnostní naložení vzorku bez ztráty kvality separace. Tyto vlastnosti činí novou kolonovou technologii atraktivní pro širokou škálu aplikací v biologické a farmaceutické analytice.

Reference

• Agilent Technologies. AdvanceBio Peptide Plus Peptide Characterization Application Note, říjen 2020, RA.5079050926.