Analysis of a Synthetic Peptide and Its Impurities

Význam tématu

Analýza čistoty syntetických peptidů a jejich nečistot je klíčová pro zabezpečení kvality léčiv, detekci vedlejších produktů a stabilitu výrobního procesu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo ověřit schopnost kolony Agilent AdvanceBio Peptide Plus oddělit syntetický peptid bivalirudin a jeho hlavní nečistoty s použitím formiové kyseliny jako mobilní fáze kompatibilní s hmotnostní spektrometrií. Metoda měla být přenositelná mezi detekcí UV a MS.

Použitá metodika a instrumentace

• Vysokotlaké kapalinové chromatografy Agilent 1290 Infinity LC s UV detektorem a Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF.
• Kolona AdvanceBio Peptide Plus (2,1×150 mm, 2,7 μm) při 60 °C.
• Eluce gradientem z 17 % do 95 % 0,1 % formiové kyseliny v acetonitrilu (flow 0,4 mL/min).
• Injekční objemy 5 μL pro UV a 1 μL pro MS, MS/MS analýza v režimu pozitivního iontu.

Hlavní výsledky a diskuse

• Metoda umožnila rozlišení pěti hlavních nečistot: delece glutamátu, glycinů, dehydratace (ztráta H₂O) a deamidace asparaginu.
• MS dekonvoluce potvrdila monoisotopickou mionovou hmotnost bivalirudinu (2178,99 Da) a odpovídající posuny hmotnosti impurit.
• MS/MS fragmentační spektra lokalizovala pozice modifikací díky charakteristickým iontům b a y.
• Formiová kyselina zajistila dostatečné maskování silanolů na hybridním povrchu kolony a příznivý tvar píku bez výrazného útlumu signálu v MS.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduché přepínání mezi UV a MS detekcí umožňuje komplexní kontrolu kvality ve farmaceutických laboratořích.
• Kompatibilita s MS snižuje čas a náklady na separátní analýzy.
• Hybridní povrch kolony zvyšuje reprodukovatelnost a umožňuje použití slabších kyselých modifikátorů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další terapeutické peptidy a jejich degradáty.
• Automatizovaná vysokopropustná analýza peptidových knihoven metodami LC/MS/MS.
• Integrace s bioinformatickou identifikací peptidových fragmentů pro rychlou charakterizaci impurit.

Závěr

Použití kolony Agilent AdvanceBio Peptide Plus s formiovou kyselinou jako mobilní fází poskytuje vysoce selektivní a přenosnou metodu pro analýzu syntetického peptidu bivalirudinu a jeho nečistot, kombinující schopnost UV detekce a citlivost MS/MS analýzy.

Reference

• Eggen I. et al. Control Strategies for Synthetic Therapeutic Peptide APIs Part III: Manufacturing Process Considerations. Pharm. Technol. 2014, 38(5).