Analysis of Purine Bases

Význam tématu

Purinové báze a jejich alkaloidy, jako jsou kofein, theofylin nebo kyselina močová, hrají klíčovou roli v biologických procesech, farmaceutickém průmyslu i potravinářství. Jejich spolehlivá a citlivá analýza je nezbytná pro kontrolu kvality léčiv, sledování metabolitů v biologických vzorcích či hodnocení kvality potravinových a nápojových výrobků. Hydrofobní interakce (HILIC) nabízí vysokou selektivitu vůči polárním látkám, které jsou obtížně separovatelné běžnými reverzními fázemi.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem prezentovaného aplikačního listu je ukázat efektivní separaci osmi klíčových purinových látek pomocí HILIC kolony Shim-pack GIST Amide. Studie demonstruje možnost simultánního stanovení kofeinu, theofylinu, theobrominu, hypoxanthinu, adeninu, xanthinu, guaninu a kyseliny močové při jednotné analytické metodě.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla využita kapalinová chromatografie v režimu HILIC. Podrobnosti metodiky:

• Kolona: Shim-pack GIST Amide (150 mm × 2,1 mm I.D., 5 µm)
• Mobilní fáze: A) acetonitril, B) 50 mmol/l roztok formiátu amonného ve vodě, C) kyselina mravenčí; poměr A/B/C = 90/10/0,1 (v/v/v)
• Průtok: 0,2 ml/min
• Teplota kolony: 40 °C
• Detekce: UV detektor při 254 nm
• Objem injekce: 0,5 µl

Klíčové vlastnosti metody jsou jednoduše připravitelná mobilní fáze, izokratický režim a minimální spotřeba vzorku.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje dobrého rozlišení jednotlivých purinových látek s ostrými a symetrickými píkami. Izokratické podmínky umožňují reprodukovatelné retence a vysoko účinné oddělení všech osmi látek během krátkého analytického času. Diskuse se zaměřuje na vliv složení organické fáze a pH mobilní fáze na selektivitu, kdy vyšší podíl acetonitrilu zajišťuje lepší retenci polárních složek.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda je vhodná pro:

• Kontrolu kvality a kvantifikaci purinových alkaloidů v potravinách a nápojích
• Farmaceutické laboratoře zabývající se vývojem a kontrolou léčivých přípravků
• Biochemická stanovení metabolitů v biologických vzorcích (moč, krev)
• Rychlou skríningovou analýzu v QA/QC odděleních

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může směřovat k využití HILIC-MS/MS pro zvýšenou citlivost a selektivitu, miniaturizaci metodiky pro mikročlánkové chromatografické systémy a automatizaci vzorkování. Kombinace s vysokorychlostními systémy UHPLC umožní zkrácení analýz a vyšší propustnost laboratoře.

Závěr

Prezentovaná HILIC metoda na koloně Shim-pack GIST Amide nabízí robustní a citlivé řešení pro separaci a kvantifikaci purinových alkaloidů. Díky jednoduché přípravě mobilní fáze a izokratickému režimu je vhodná pro rutinní analýzy v různých odvětvích analytické chemie.

Reference

• Shimadzu Corporation. ERAS-1000-0247: Analysis of Purine Bases by HILIC. First Edition, December 2021.