LCMS
Další informace
WebinářeO násKontaktujte násPodmínky užití
LabRulez s.r.o. Všechna práva vyhrazena. Obsah dostupný pod licencí CC BY-SA 4.0 Uveďte původ-Zachovejte licenci.
Autor
Waters Corporation
Firmu Waters založil v roce 1958 pan James Waters. Od té doby se společnost Waters specializuje na kapalinovou chromatografii a hmotnostní spektrometrii. Divize TA Instruments působí na poli termální analýzy. V České republice je Waters zastoupen přímou pobočkou, která sídlí v Praze.
Tagy
Přednáška
Video
Článek
Logo of LinkedIn

Vliv systémového objemu na gradientovou separaci (VIZE 2021)

Čt, 15.12.2022
| Originální článek z: Waters/VIZE 2021
Záznam přednášky Ing. Petra Butzkeho ze semináře Waters VIZE 2021 o vlivu systémového objemu na gradientovou separaci např. při převodu metod mezi různými HPLC instrumenty.
Video placeholder

Waters Corporation: Vliv systémového objemu na gradientovou separaci (VIZE 2021)

Proč se liší separace směsi látek za identických podmínek na různých chromatografických systémech?

Chromatografické systémy mají rozdílnou specifikaci: Gradient delay volume (systémový objem)

Pojmy „dwell volume“, „void volume“ a ekvivalenty v češtině

Dwell volume (systémový objem)

Vnitřní objem fluidických cest chromatografického systému od místa, kde dochází k smísení složek mobilní fáze při tvorbě gradientu mobilní fáze až k místu injektáže vzorku.

Void volume (dead volume, mrtvý objem)

Objem mobilní fáze pro nezadržovanou složku v chromatografickém systému. Složka se pohybuje rychlostí mobilní fáze. Jsou to fluidické cesty (a volný objem v koloně) mezi injektorem a detektorem.

Vysokotlaký gradient

Tvorba vysokotlakého gradientu s použitím dvou čerpadel.

Waters Corporation: Vysokotlaký HPLC gradient

  • (1) zásobníky mobilní fáze
  • (2A,B) selekční ventily
  • (3) hlavy čerpadla
  • (4) písty čerpadla s pružinou
  • (5) pohonná jednotka čerpadla s motorem
  • (6) směšovač
  • (7) směr toku mobilní fáze k vysokotlaké části systému

Nízkotlaký gradient

Tvorba nízkotlakého gradientu pomocí rychlého proporcionálního ventilu.

Waters Corporation: Nízkotlaký HPLC gradient

  • (1) zásobníky mobilní fáze
  • (2) gradientový proporcionální ventil
  • (3) hlavy čerpadla
  • (4) písty čerpadla s pružinou
  • (5) pohonná jednotka čerpadla s motorem
  • (6) směšovač
  • (7) směr toku mobilní fáze

Systémový objem

Porovnání vysokotlaký vs. nízkotlaký gradient.

Waters Corporation: Porovnání vysokotlakého a nízkotlakého gradientu

Příklad gradientové separace Acquity H class

Efekt nastavení synchronizace startu gradientu s nástřikem vzorku.

Waters Corporation: Příklad gradientu Acquity H class

  • A: Voda, B: ACN
  • Průtok mobilní fáze 0,6 ml/min.
  • Gradient má reálně zpoždění dané systémovým objemem.
  • V tomto konkrétním příkladu cca 450 ul.

Waters Corporation: Příklad gradientu Acquity H class

  • Nástřik vzorku a start gradientu mobilní fáze proběhl v čase „0“.
  • Gradient podle zadání: (modrá)
  • Reálný gradient (efekt „dwell volume“): (zelená)

Možnosti eliminace rozdílů systémového objemu HPLC/UPLC/UHPLC chromatografů

Použití funkce „Gradient Start“ umožňuje eliminovat rozdíl v systémovém objemu při transferu metod bez zásahu do psaného gradientu.

  • „At injection“ (default nastavení)
  • „Before injection“
  • „After injection“

Waters Corporation: Použití funkce „Gradient Start“

Efekt použití znalosti systémového objemu chromatografu sub 2 um částice

Příklad separace s použitím eliminace systémového objemu.

  1. Start gradientu a nástřiku v jednom okamžiku.
  2. Gradient odstartován, po odčerpání 450 ul následuje nástřik vzorku.
  3. Nástřik, gradient odstartován po odčerpání 450 ul
  • Průběh gradientu dle instrumentové metody: (modrá)
  • „Reálný“ průběh gradient: (zelená)

Waters Corporation: Příklad separace s použitím eliminace systémového objemu

Jak zjistit hodnotu systémového objemu

Waters Corporation: Jak zjistit hodnotu systémového objemu

  • Line A: voda, Line B: 10 % THF voda, průtok: 1 ml/min
  • Gradient: 0 min 100 % A, ve 2. minutě skoková změna na 100 % B, 3. min 100 % A
  • Fluidické spojení: přes spojku
  • Detekce 220 nm
Ukázka změření rozdílu hodnoty „dwell volume“ na systému Acquity H class
  • Zelený záznam: injektor bez 50 ul extended loop.
  • Červený záznam: nainstalována 50 ul ext. loop.

Waters Corporation: Ukázka změření rozdílu hodnoty „dwell volume“ na systému Acquity H class

Primitivním změřením pravítkem a přepočtem vzdálenosti mezi křivkami na objem (dle velikosti průtoku mobilní fáze)*: 45 ul

  • Běžná tolerance na přesnost smyček je 15 % a nepřesnost měření malé vzdálenosti pravítkem.

Tip pro vývoj separačních podmínek

Waters Corporation: Tip pro vývoj separačních podmínek

Efekt použití znalosti systémového objemu chromatografu 3,5 um částice

Instrumentová metoda – gradientová tabulka W2695

Waters Corporation: Instrumentová metoda – gradientová tabulka W2695

  • Separační modul W2695
  1. Start I + G společně
  • Průběh gradientu dle instrumentové metody: (zelená)
  • „Reálný“ průběh gradient: (modrá)
  1. Start G, po odčerpání 1000 ul proveden nástřik

Waters Corporation: Efekt použití znalosti systémového objemu chromatografu 3,5 um částice

Waters Corporation: Porovnání Acquity H class a W2695

Porovnání: W 2695 a Acquity H class

Waters Corporation: Porovnání W2695 a Acquity H class

Waters Corporation
 

Mohlo by Vás zajímat

USP-Compliant Analysis of Antibody Drugs Using Size-Exclusion Chromatography (SEC)

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
GPC/SEC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

ACQUITY QDa II Mass Detector brochure

Brožury a specifikace
| 2024 | Waters
Instrumentace
LC/MS, LC/SQ
Výrobce
Waters
Zaměření
Ostatní

Analysis of Per- and Polyfluoroalkyl Substances in Fast Food Packaging by LC-MS/MS Method

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Potraviny a zemědělství

Watrex product catalog 2024

Brožury a specifikace
| 2024 | Watrex Praha
Instrumentace
HPLC, GPC/SEC, Příprava vzorků, LC kolony, Spotřební materiál
Výrobce
Watrex Praha
Zaměření
Ostatní

IMPACT OF HPLC INSTRUMENTATION ON NON- SPECIFIC ADSORPTION OF PEPTIDES

Postery
| 2024 | Waters (Analytica)
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Waters
Zaměření
Proteomika
 

Podobné články


Článek | Akademie

Titrace - definice a principy

Titrace je jednou z nejstarších analytických metod, která nachází uplatnění v různých průmyslových odvětvích. Tento příspěvek se zabývá principem titrace, jejím průběhem a popisem různých typů titrací.
Metrohm Česká republika
more

Článek | Produkt

Metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství mykotoxinů a toxinů v potravinách

Nová prováděcí nařízení komise [(EU) 2023/2782, (EU) 2023/2783], která stanovují metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství rostlinných toxinů a mykotoxinů v potravinách.
ALS Czech Republic
more

Článek | Různé

Středoškolská odborná činnost neboli SOČ – brána do světa vědy

Středoškolská odborná činnost má v ČR dlouhou tradici, s každoroční účastí více než tisíce studentů. Nejlepší řešitelé se účastní mezinárodních soutěží. Přesto není dostatečně státem finančně podporována.
Vědavýzkum.cz
more

Video | Osobnosti

Podcast CHEmic #28 – Věda je život mezi extází a depresí, ale neměnila bych, říká Marcela Krečmerová

Marcela Krečmerová pracovala v laboratoři Antonína Holého a navazuje na výzkum Aloise Pískaly. Věnuje se nukleosidové chemii a je hostem podcastu CHEmic.
Ústav organické chemie a biochemie AV ČR
more
 

Mohlo by Vás zajímat

USP-Compliant Analysis of Antibody Drugs Using Size-Exclusion Chromatography (SEC)

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
GPC/SEC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

ACQUITY QDa II Mass Detector brochure

Brožury a specifikace
| 2024 | Waters
Instrumentace
LC/MS, LC/SQ
Výrobce
Waters
Zaměření
Ostatní

Analysis of Per- and Polyfluoroalkyl Substances in Fast Food Packaging by LC-MS/MS Method

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Potraviny a zemědělství

Watrex product catalog 2024

Brožury a specifikace
| 2024 | Watrex Praha
Instrumentace
HPLC, GPC/SEC, Příprava vzorků, LC kolony, Spotřební materiál
Výrobce
Watrex Praha
Zaměření
Ostatní

IMPACT OF HPLC INSTRUMENTATION ON NON- SPECIFIC ADSORPTION OF PEPTIDES

Postery
| 2024 | Waters (Analytica)
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Waters
Zaměření
Proteomika
 

Podobné články


Článek | Akademie

Titrace - definice a principy

Titrace je jednou z nejstarších analytických metod, která nachází uplatnění v různých průmyslových odvětvích. Tento příspěvek se zabývá principem titrace, jejím průběhem a popisem různých typů titrací.
Metrohm Česká republika
more

Článek | Produkt

Metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství mykotoxinů a toxinů v potravinách

Nová prováděcí nařízení komise [(EU) 2023/2782, (EU) 2023/2783], která stanovují metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství rostlinných toxinů a mykotoxinů v potravinách.
ALS Czech Republic
more

Článek | Různé

Středoškolská odborná činnost neboli SOČ – brána do světa vědy

Středoškolská odborná činnost má v ČR dlouhou tradici, s každoroční účastí více než tisíce studentů. Nejlepší řešitelé se účastní mezinárodních soutěží. Přesto není dostatečně státem finančně podporována.
Vědavýzkum.cz
more

Video | Osobnosti

Podcast CHEmic #28 – Věda je život mezi extází a depresí, ale neměnila bych, říká Marcela Krečmerová

Marcela Krečmerová pracovala v laboratoři Antonína Holého a navazuje na výzkum Aloise Pískaly. Věnuje se nukleosidové chemii a je hostem podcastu CHEmic.
Ústav organické chemie a biochemie AV ČR
more
 

Mohlo by Vás zajímat

USP-Compliant Analysis of Antibody Drugs Using Size-Exclusion Chromatography (SEC)

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
GPC/SEC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

ACQUITY QDa II Mass Detector brochure

Brožury a specifikace
| 2024 | Waters
Instrumentace
LC/MS, LC/SQ
Výrobce
Waters
Zaměření
Ostatní

Analysis of Per- and Polyfluoroalkyl Substances in Fast Food Packaging by LC-MS/MS Method

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Potraviny a zemědělství

Watrex product catalog 2024

Brožury a specifikace
| 2024 | Watrex Praha
Instrumentace
HPLC, GPC/SEC, Příprava vzorků, LC kolony, Spotřební materiál
Výrobce
Watrex Praha
Zaměření
Ostatní

IMPACT OF HPLC INSTRUMENTATION ON NON- SPECIFIC ADSORPTION OF PEPTIDES

Postery
| 2024 | Waters (Analytica)
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Waters
Zaměření
Proteomika
 

Podobné články


Článek | Akademie

Titrace - definice a principy

Titrace je jednou z nejstarších analytických metod, která nachází uplatnění v různých průmyslových odvětvích. Tento příspěvek se zabývá principem titrace, jejím průběhem a popisem různých typů titrací.
Metrohm Česká republika
more

Článek | Produkt

Metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství mykotoxinů a toxinů v potravinách

Nová prováděcí nařízení komise [(EU) 2023/2782, (EU) 2023/2783], která stanovují metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství rostlinných toxinů a mykotoxinů v potravinách.
ALS Czech Republic
more

Článek | Různé

Středoškolská odborná činnost neboli SOČ – brána do světa vědy

Středoškolská odborná činnost má v ČR dlouhou tradici, s každoroční účastí více než tisíce studentů. Nejlepší řešitelé se účastní mezinárodních soutěží. Přesto není dostatečně státem finančně podporována.
Vědavýzkum.cz
more

Video | Osobnosti

Podcast CHEmic #28 – Věda je život mezi extází a depresí, ale neměnila bych, říká Marcela Krečmerová

Marcela Krečmerová pracovala v laboratoři Antonína Holého a navazuje na výzkum Aloise Pískaly. Věnuje se nukleosidové chemii a je hostem podcastu CHEmic.
Ústav organické chemie a biochemie AV ČR
more
 

Mohlo by Vás zajímat

USP-Compliant Analysis of Antibody Drugs Using Size-Exclusion Chromatography (SEC)

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
GPC/SEC
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Farmaceutická analýza

ACQUITY QDa II Mass Detector brochure

Brožury a specifikace
| 2024 | Waters
Instrumentace
LC/MS, LC/SQ
Výrobce
Waters
Zaměření
Ostatní

Analysis of Per- and Polyfluoroalkyl Substances in Fast Food Packaging by LC-MS/MS Method

Aplikace
| 2024 | Shimadzu
Instrumentace
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
Výrobce
Shimadzu
Zaměření
Potraviny a zemědělství

Watrex product catalog 2024

Brožury a specifikace
| 2024 | Watrex Praha
Instrumentace
HPLC, GPC/SEC, Příprava vzorků, LC kolony, Spotřební materiál
Výrobce
Watrex Praha
Zaměření
Ostatní

IMPACT OF HPLC INSTRUMENTATION ON NON- SPECIFIC ADSORPTION OF PEPTIDES

Postery
| 2024 | Waters (Analytica)
Instrumentace
HPLC
Výrobce
Waters
Zaměření
Proteomika
 

Podobné články


Článek | Akademie

Titrace - definice a principy

Titrace je jednou z nejstarších analytických metod, která nachází uplatnění v různých průmyslových odvětvích. Tento příspěvek se zabývá principem titrace, jejím průběhem a popisem různých typů titrací.
Metrohm Česká republika
more

Článek | Produkt

Metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství mykotoxinů a toxinů v potravinách

Nová prováděcí nařízení komise [(EU) 2023/2782, (EU) 2023/2783], která stanovují metody odběru vzorků a analýzy pro kontrolu množství rostlinných toxinů a mykotoxinů v potravinách.
ALS Czech Republic
more

Článek | Různé

Středoškolská odborná činnost neboli SOČ – brána do světa vědy

Středoškolská odborná činnost má v ČR dlouhou tradici, s každoroční účastí více než tisíce studentů. Nejlepší řešitelé se účastní mezinárodních soutěží. Přesto není dostatečně státem finančně podporována.
Vědavýzkum.cz
more

Video | Osobnosti

Podcast CHEmic #28 – Věda je život mezi extází a depresí, ale neměnila bych, říká Marcela Krečmerová

Marcela Krečmerová pracovala v laboratoři Antonína Holého a navazuje na výzkum Aloise Pískaly. Věnuje se nukleosidové chemii a je hostem podcastu CHEmic.
Ústav organické chemie a biochemie AV ČR
more
Další projekty
Sledujte nás
Další informace
WebinářeO násKontaktujte násPodmínky užití
LabRulez s.r.o. Všechna práva vyhrazena. Obsah dostupný pod licencí CC BY-SA 4.0 Uveďte původ-Zachovejte licenci.