Making Peptide Mapping Routine with the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF
Aplikace | 2017 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Peptidové mapování monoklonálních protilátek je nezbytné pro potvrzení primární struktury, lokalizaci posttranslačních modifikací a zajištění kvality biotherapeutik.
Práce představuje vývoj rutinního, výkonného workflow pro peptidové mapování využívající automatizaci přípravy vzorků, rychlou UHPLC separaci a přesnou hmotnostní spektrometrii s automatizovanou analýzou dat.
Dosáhnuto 99.4 procentního pokrytí sekvence mAb v rámci 15minutového gradientu. Hmotnostní přesnost měření byla pod 1 ppm a identifikováno bylo více než 200 peptidů. Posttranslační modifikace, jako oxidace methioninu a deamidace asparaginu, byly jednoznačně potvrzeny na základě charakteristických fragmentačních vzorců v MS MS.
Navržený workflow výrazně zkracuje dobu analýzy a minimalizuje manuální zásahy. Metoda je vhodná pro rutinní QA QC v biopharmaceutickém průmyslu, výzkumných laboratořích a klinických studiích.
Očekává se integrace pokročilých algoritmů strojového učení pro lepší detekci vzácných modifikací, rozšíření metody na další biotherapeutika a komplexní proteomické analýzy a zvýšení throughputu díky paralelní přípravě vzorků.
Propojení automatizované přípravy vzorků, rychlé UHPLC separace a vysokorozlišovací Q TOF detekce s automatickou analýzou dat proměňuje peptidové mapování z náročného postupu do rutinního, spolehlivého procesu s výbornou kvalitou a efektivitou.
LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS
ZaměřeníProteomika
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Peptidové mapování monoklonálních protilátek je nezbytné pro potvrzení primární struktury, lokalizaci posttranslačních modifikací a zajištění kvality biotherapeutik.
Cíle a přehled studie
Práce představuje vývoj rutinního, výkonného workflow pro peptidové mapování využívající automatizaci přípravy vzorků, rychlou UHPLC separaci a přesnou hmotnostní spektrometrii s automatizovanou analýzou dat.
Použitá metodika a instrumentace
- Příprava vzorků pomocí Agilent AssayMAP Bravo liquid handling robot
- Digestion mAb standardu RM 8671 enzymem Trypsin/Lys C
- UHPLC separace na Agilent 1290 Infinity II s AdvanceBio Peptide Mapping kolonkou (2.1×150 mm, 2.7 µm)
- Detekce na Agilent 6545XT AdvanceBio LC Q TOF s Dual Jet Stream ESI
- Automatizovaná analýza dat v Agilent MassHunter BioConfirm B.08
Hlavní výsledky a diskuse
Dosáhnuto 99.4 procentního pokrytí sekvence mAb v rámci 15minutového gradientu. Hmotnostní přesnost měření byla pod 1 ppm a identifikováno bylo více než 200 peptidů. Posttranslační modifikace, jako oxidace methioninu a deamidace asparaginu, byly jednoznačně potvrzeny na základě charakteristických fragmentačních vzorců v MS MS.
- Přesnost měření menší než 1 ppm
- Rychlé rozlišení peptidů v krátkém gradientu
- Automatizovaná validace sekvence a detekce modifikací
Přínosy a praktické využití metody
Navržený workflow výrazně zkracuje dobu analýzy a minimalizuje manuální zásahy. Metoda je vhodná pro rutinní QA QC v biopharmaceutickém průmyslu, výzkumných laboratořích a klinických studiích.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se integrace pokročilých algoritmů strojového učení pro lepší detekci vzácných modifikací, rozšíření metody na další biotherapeutika a komplexní proteomické analýzy a zvýšení throughputu díky paralelní přípravě vzorků.
Závěr
Propojení automatizované přípravy vzorků, rychlé UHPLC separace a vysokorozlišovací Q TOF detekce s automatickou analýzou dat proměňuje peptidové mapování z náročného postupu do rutinního, spolehlivého procesu s výbornou kvalitou a efektivitou.
Reference
- Agilent Automation for LC MS Sample Preparation High Throughput In Solution Digestion and Peptide Cleanup Enabled by the Agilent AssayMAP Bravo Platform 5991 2957EN
- Fast and Efficient Peptide Mapping of a Monoclonal Antibody UHPLC Performance with Superficially Porous Particles 5991 3585EN
- High Resolution and Rapid Peptide Mapping of Monoclonal Antibody Using an Agilent 1290 Infinity UHPLC and an Agilent 6550 iFunnel Q TOF LC MS System 5991 3600EN
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
In-depth Peptide Mapping with Iterative MS/MS Acquisition on the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q‑TOF
2020|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Biotherapeutics and Biosimilars In-depth Peptide Mapping with Iterative MS/MS Acquisition on the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q‑TOF Authors Introduction Linfeng Wu and David L. Wong Agilent Technologies, Inc. Santa Clara, CA, USA Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) represent one of…
Klíčová slova
ntaylqmnslr, ntaylqmnslriterative, iterativepeptide, peptidemapping, mappingcounts, countsauto, autoacquisition, acquisitionassaymap, assaymapcharge, chargeprecursors, precursorseccs, eccsmass, massbravo, bravoagilent, agilentisoasp
An Integrated Workflow for Peptide Mapping of Monoclonal Antibodies
2017|Agilent Technologies|Aplikace
An Integrated Workflow for Peptide Mapping of Monoclonal Antibodies Application Note Biotherapeutics and Biosimilars Authors Introduction David L. Wong Monoclonal antibodies (mAbs) represent one of the fastest growing classes of drugs in the pharmaceutical industry. As a protein drug, the…
Klíčová slova
peptide, peptidemab, mabmapping, mappingcounts, countsassaymap, assaymapsgtasvvcllnnfypr, sgtasvvcllnnfypracquisition, acquisitionworkflow, workflowcharge, chargewere, werenist, nistsequence, sequencedigestion, digestiondiqmtqspstlsasvgdrvtitcsassr, diqmtqspstlsasvgdrvtitcsassrmtqspstlsasvgdrvtitcsassr
Peptide Mapping - Agilent BioHPLC Columns Application Compendium
|Agilent Technologies|Příručky
Agilent-NISTmAb Peptide Mapping Agilent BioHPLC Columns Application Compendium Contents Agilent-NISTmAb Standard (P/N 5191-5744; 5191-5745) was aliquoted from NISTmAb RM 8671 batch. Quality control (QC) testing is performed using Agilent LC-MS system. QC batch release test includes aggregate profile, charge variants…
Klíčová slova
peptide, peptidemapping, mappingpage, pagecontents, contentsback, backadvancebio, advancebiocdr, cdrpeptides, peptidesagilent, agilentmin, minassaymap, assaymapmap, mappqas, pqasattributes, attributesmsd
LC/MS/MS Peptide Mapping Comparison of Innovator and Biosimilars of Rituximab
2019|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Biotherapeutics and Biosimilars LC/MS/MS Peptide Mapping Comparison of Innovator and Biosimilars of Rituximab Author Suresh Babu C.V. Agilent Technologies, Inc. Abstract The development and manufacturing of biosimilars require comparability studies with innovator biotherapeutic products. This Application Note presents…
Klíčová slova
innovator, innovatorpeptide, peptidecounts, countschain, chainmapping, mappingbiosimilar, biosimilarcharge, chargeunmodified, unmodifiedptms, ptmsheavy, heavyassaymap, assaymapbiosimilars, biosimilarsttppvldsdgsfflyskl, ttppvldsdgsfflysklmabs, mabsbravo
