LC/MS/MS Peptide Mapping Comparison of Innovator and Biosimilars of Rituximab
Aplikace | 2019 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Vývoj biosimilárních monoklonálních protilátek je klíčový pro zpřístupnění cenově dostupných bioterapeutik po vypršení patentů inovátorských produktů. Peptidové mapování pomocí LC/MS/MS nabízí detailní pohled na sekvenční pokrytí a posttranslační modifikace, které rozhodují o bezpečnosti a účinnosti finálních léčiv.
Cílem studie bylo porovnat inovátorskou verzi rituximabu s dvěma jejími biosimilary. Použita byla integrovaná workflow pro tryptickou digesci, chromatografickou separaci a hmotnostní spektrometrii s iterativním sběrem MS/MS dat. Analýza v software MassHunter BioConfirm měla za úkol vyhodnotit sekvenční pokrytí a kvantifikovat vybrané posttranslační modifikace (oxidace, deamidace, odtržení Lys, cyklizace Gln).
Integrované LC/MS/MS peptidové mapování s rychlou automatizovanou přípravou a pokročilou softwareovou analýzou umožňuje spolehlivou a opakovatelnou komparabilní analýzu biosimilárních protilátek. Výsledky pomáhají regulátorům a výrobním laboratořím v důkazech podobnosti, řízení kvality a optimalizaci výrobních procesů.
Popsaná metoda pro LC/MS/MS peptidové mapování na špičkovém Agilent řešení poskytuje výjimečnou sekvenční pokrytí a citlivou detekci klíčových PTM. Díky automatizaci přípravy i sofistikované datové analýze lze efektivně porovnávat inovátorské a biosimilární protilátky, což podporuje rychlejší vývoj a schvalování kvalitních bioterapeutik.
LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS
ZaměřeníFarmaceutická analýza, Proteomika
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Vývoj biosimilárních monoklonálních protilátek je klíčový pro zpřístupnění cenově dostupných bioterapeutik po vypršení patentů inovátorských produktů. Peptidové mapování pomocí LC/MS/MS nabízí detailní pohled na sekvenční pokrytí a posttranslační modifikace, které rozhodují o bezpečnosti a účinnosti finálních léčiv.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem studie bylo porovnat inovátorskou verzi rituximabu s dvěma jejími biosimilary. Použita byla integrovaná workflow pro tryptickou digesci, chromatografickou separaci a hmotnostní spektrometrii s iterativním sběrem MS/MS dat. Analýza v software MassHunter BioConfirm měla za úkol vyhodnotit sekvenční pokrytí a kvantifikovat vybrané posttranslační modifikace (oxidace, deamidace, odtržení Lys, cyklizace Gln).
Použitá metodika a instrumentace
- Automatizovaná příprava vzorků: Agilent AssayMAP Bravo liquid-handling platforma
- Chromatografie: Agilent 1290 Infinity II LC System s AdvanceBio Peptide Mapping kolonkou (2.1×150 mm, 2.7 μm)
- Hmotnostní spektrometrie: Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF s iterativním sběrem MS/MS
- Software: Agilent MassHunter BioConfirm B.10 pro extrakci molekulárních vlastností, identifikaci peptidů a relativní kvantifikaci PTM
Hlavní výsledky a diskuse
- Sekvenční pokrytí pro těžký řetězec dosáhlo více než 97 %, pro lehký řetězec až 100 % u všech vzorků.
- Iontogramy ukázaly rozdíly ve vysoce výrazných peptidech mezi inovátorem a biosimilary, například truncace C-terminální Lys.
- Oxidace Met a deamidace Asn byly kvantifikovány jako kritické kvalifikátory, s vyšší mírou oxidace u jednoho biosimiláru a výrazně zvýšenou deamidací u Asn388 ve dvou biosimilarech (~20 %) ve srovnání s~inovátorem (~11 %).
- Další PTM jako pyroGlu vznikající z Gln1 nebo ztráta Lys u C-konce byla rovněž monitorována a mezi vzorky prokázala jemné rozdíly.
Přínosy a praktické využití metody
Integrované LC/MS/MS peptidové mapování s rychlou automatizovanou přípravou a pokročilou softwareovou analýzou umožňuje spolehlivou a opakovatelnou komparabilní analýzu biosimilárních protilátek. Výsledky pomáhají regulátorům a výrobním laboratořím v důkazech podobnosti, řízení kvality a optimalizaci výrobních procesů.
Budoucí trendy a možnosti využití
- Rozšíření workflow o kvantitativní přístupy izotopového značkování pro absolutní měření PTM.
- Implementace strojového učení pro zrychlení identifikace a korelaci modifikací s biologickou aktivitou.
- Miniaturizace a vysokopropustné platformy pro screening širšího spektra biosimilárních kandidátů.
- Integrace multi-omics dat pro komplexní charakterizaci struktury, stability a funkce bioterapeutik.
Závěr
Popsaná metoda pro LC/MS/MS peptidové mapování na špičkovém Agilent řešení poskytuje výjimečnou sekvenční pokrytí a citlivou detekci klíčových PTM. Díky automatizaci přípravy i sofistikované datové analýze lze efektivně porovnávat inovátorské a biosimilární protilátky, což podporuje rychlejší vývoj a schvalování kvalitních bioterapeutik.
Reference
- Ecker DM, Jones SD, Levine HL. The Therapeutic Monoclonal Antibody Market. MAbs. 7(1):9-14, 2015.
- Agilent Technologies. Application Note LC/MS/MS Peptide Mapping Comparison of Innovator and Biosimilars of Rituximab. Publication number 5994-1495EN, 2019.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Peptide Mapping of Innovator and Biosimilar Monoclonal Antibody Using an Agilent 1290 Infinity UHPLC Coupled to an Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS System
2017|Agilent Technologies|Aplikace
Peptide Mapping of Innovator and Biosimilar Monoclonal Antibody Using an Agilent 1290 Infinity UHPLC Coupled to an Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS System Application Note Author Introduction Ravindra Gudihal Monoclonal antibodies (mAbs) are becoming one of the important classes of…
Klíčová slova
peptide, peptideinnovator, innovatorbiosimilar, biosimilardeamidation, deamidationcounts, countsdltmisr, dltmisroxidation, oxidationmapping, mappingtrypsin, trypsinunmodified, unmodifiedoxi, oxiions, ionsheight, heightcharge, chargegfypsdiavewesngqpennyk
In-depth Peptide Mapping with Iterative MS/MS Acquisition on the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q‑TOF
2020|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Biotherapeutics and Biosimilars In-depth Peptide Mapping with Iterative MS/MS Acquisition on the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q‑TOF Authors Introduction Linfeng Wu and David L. Wong Agilent Technologies, Inc. Santa Clara, CA, USA Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) represent one of…
Klíčová slova
ntaylqmnslr, ntaylqmnslriterative, iterativepeptide, peptidemapping, mappingcounts, countsauto, autoacquisition, acquisitionassaymap, assaymapcharge, chargeprecursors, precursorseccs, eccsmass, massbravo, bravoagilent, agilentisoasp
Enhancing The Quality Of Peptide Mapping Separation For The Analysis Of PTM
2017|Agilent Technologies|Aplikace
Enhancing The Quality Of Peptide Mapping Separation For The Analysis Of PTM Application Note Biotherapeutics and Biosimilars Author Introduction Suresh Babu C.V. Post-translational modifications (PTMs) on proteins such as monoclonal antibodies (mAbs) are critical quality attributes (CQAs) that define the…
Klíčová slova
peptide, peptidecounts, countsntaylqmnslr, ntaylqmnslradvancebio, advancebiodltmisr, dltmisrmab, mabeeeqynstr, eeeqynstrptms, ptmsdeamidated, deamidatedplus, plusdigest, digestmapping, mappingseparation, separationtryptic, trypticnonoxidized
An Integrated Workflow for Peptide Mapping of Monoclonal Antibodies
2017|Agilent Technologies|Aplikace
An Integrated Workflow for Peptide Mapping of Monoclonal Antibodies Application Note Biotherapeutics and Biosimilars Authors Introduction David L. Wong Monoclonal antibodies (mAbs) represent one of the fastest growing classes of drugs in the pharmaceutical industry. As a protein drug, the…
Klíčová slova
peptide, peptidemab, mabmapping, mappingcounts, countsassaymap, assaymapsgtasvvcllnnfypr, sgtasvvcllnnfypracquisition, acquisitionworkflow, workflowcharge, chargewere, werenist, nistsequence, sequencedigestion, digestiondiqmtqspstlsasvgdrvtitcsassr, diqmtqspstlsasvgdrvtitcsassrmtqspstlsasvgdrvtitcsassr
