Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 μm columns - Fast Separations for Aggregates and Fragments

Význam tématu

Size exclusion chromatography (SEC) je klíčová metoda pro hodnocení objemných proteinových agregátů a nízkomolekulárních fragmentů, zejména u monoklonálních protilátek (mAb) a konjugátů protilátek s léčivy (ADC). Kontrola agregátů je zásadní pro zajištění biologické aktivity, stability a bezpečnosti bioterapeutik. Rychlé a spolehlivé separace přispívají k efektivitě výzkumu, vývoje a rutinní kontroly kvality v biotechnologických a farmaceutických laboratořích.

Cíle a přehled studie / článku

Článek představuje sloupce Agilent AdvanceBio SEC 200 Å s částicemi 1,9 µm optimalizované pro UHPLC i HPLC systémy. Hlavním cílem je demonstrovat zvýšenou rozlišovací schopnost, zkrácený čas analýzy a dlouhodobou stabilitu při stanovení mAb agregátů a nízkomolekulárních fragmentů.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnuje SEC analýzu vzorku SigmaMAb obsahujícího monomery, dimer a fragmenty LMW1/LMW2. Jako mobilní fáze byla použita 50 mM fosfátový pufr s 200 mM NaCl (pH 7,0). Průtok 0,35 mL/min při 25 °C, objem injekce 1–2 µL, detekce UV při 220 nm.

• Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC systém
• Software Agilent OpenLab CDS
• Kolony AdvanceBio SEC 200 Å, 1,9 µm, rozměry 4,6×300 mm a 4,6×150 mm

Hlavní výsledky a diskuse

Analýzy prokázaly, že AdvanceBio SEC 1,9 µm poskytují lepší rozlišení monomeru, dimeru a fragmentů než konkurenční 1,7 µm a 2,0 µm sloupce. Dosahované hodnoty šířky vrcholu (50 %) i hodnoty rozlišení (Rs) byly výrazně vyšší, navíc byl u AdvanceBio sloupce nižší zpětný tlak. Vyhodnocení sekundárních interakcí ukázalo, že díky unikátní hydrofilní povrchové úpravě nedochází k nežádoucím zpožděním eluce či rozštěpení píků.
Mechanická odolnost byla potvrzena méně než 2% poklesem účinnosti po 400 injekcích při cyklickém zastavení a spuštění průtoku. Rychlá analýza na kratším 150 mm sloupci při zvýšeném průtoku 0,7 mL/min umožňuje zpracovat až 480 vzorků za 24 hodin při zachování srovnatelného rozlišení.

Přínosy a praktické využití metody

• Vyšší produktivita laboratoře díky zkráceným doběhnutím analýz a delší životnosti sloupce
• Konzistentní a reprodukovatelné výsledky pro rutinní QC mAb a ADC
• Snížení nákladů na spotřební materiál a údržbu díky robustnosti

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování zahrnuje integraci sloupců AdvanceBio SEC do plně automatizovaných LC–MS workflow, vývoj adaptivních metod pro komplexní biologické směsi a rozšíření aplikací na nové biologické makromolekuly. V budoucnu lze očekávat optimalizaci částic pro analýzu glykovaných forem a dalších posttranslačních modifikací.

Závěr

Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1,9 µm sloupce představují významný pokrok v analýze proteinových agregátů a fragmentů. Nabízejí vynikající rozlišení, nízké sekundární interakce, dlouhodobou stabilitu a vysokou propustnost, což přináší výhody jak ve vývojových, tak v rutinních QC laboratořích.

Reference

Žádné uvedené literární odkazy ve výchozím textu.