High-Resolution Analysis of Peptides and Proteins - New AdvanceBio SEC 120 Å 1.9 μm columns

Význam tématu

Chromatografie vylučovací velikosti (SEC) je základní metodou pro hodnocení proteinových a peptidových agregátů, které jsou zásadními kritickými parametry kvality bioléčiv. Správné stanovení velikostních variant ovlivňuje bezpečnost, účinnost a imunogenicitu produktů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie je představit novou řadu kolonek Agilent AdvanceBio SEC 120 Å s částicemi o velikosti 1,9 µm optimalizovaných pro UHPLC a HPLC. Studie porovnává tyto kolonky s konkurenčními materiály z hlediska rozlišení, účinnosti separace, inercie povrchu a životnosti.

Použitá metodika a instrumentace

Pro měření byly využity následující přístroje a podmínky:

• Instrument: Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC system
• Software: Agilent OpenLab CDS
• Kolonka: AdvanceBio SEC 120 Å 1,9 µm (4,6 × 300 mm)
• Průtok: 0,30–0,35 mL/min
• Eluent: arginin/ocetová kyselina/acetonitril (65/15/20 v/v/v) nebo fosfátový pufr pH 6,8–7,0
• Teplota: 25 °C
• Detekce: UV/VWD při vlnových délkách 220–276 nm
• Vzorky: lidský inzulin (stresovaný), lidský růstový hormon, proteinová směs a uridin

Hlavní výsledky a diskuse

Nové 1,9 µm částice zajišťují vysoké rozlišení malých proteinů a peptidů díky optimalizované velikosti pórů a sníženým nespecifickým interakcím. Porovnání ukázalo:

• Vyšší efektivitu separace a lepší tvar špiček oproti konkurenčním kolonkám (např. hodnoty rozlišení Rs až 4,03 versus 2,19 a 1,62).
• Vynikající zotavení monomeru u stresovaného inzulinu s minimálními ztrátami způsobenými sekundárními interakcemi.
• Prodlouženou životnost kolonek s méně než 10 % poklesem platového čísla po více než 550 injekcích.
• Vysokou opakovatelnost a reprodukovatelnost mezi šaržemi potvrzenou testy kvality.

Přínosy a praktické využití metody

AdvanceBio SEC 120 Å 1,9 µm poskytuje spolehlivou a rychlou analýzu proteinových agregátů a fragmentů v bioproduktech. Metoda nabízí nižší provozní náklady díky delší životnosti kolonek a redukci opakovaných analýz. Výsledky lze kvalifikovat i kvantifikovat v rámci QA/QC a výzkumných laboratoří.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření validovaných metod pro regulované laboratoře, integrace s automatizovanými platformami a rozvoj kombinovaných technik pro komplexní charakterizaci bioléčiv. Dále lze předpokládat vývoj specializovaných testovacích sad a softwarových nástrojů pro rychlejší interpretaci dat.

Závěr

Agilent AdvanceBio SEC 120 Å 1,9 µm kolonky nabízejí vynikající kombinaci rozlišení, inercie, trvanlivosti a reprodukovatelnosti. Jsou vhodné pro analytiku malých proteinů a peptidů v biotechnologickém sektoru a přispívají k efektivnímu řízení kvality bioléčiv.