Aggregate Analysis of Biotherapeutics

Význam tématu

Metoda velikostně selektivní chromatografie (SEC) je zásadní pro kontrolu kvality bioterapeutik, zejména monoklonálních protilátek, virových částic a oligonukleotidů. Agregace a fragmentace proteinů ovlivňuje účinnost i bezpečnost finálního produktu, proto je přesná analýza agregátů nezbytná v průběhu vývoje a výroby.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem předloženého whitepaperu je představit portfolium SEC kolon od společnosti Agilent optimalizované pro rozlišení monomerů, dimerů a víceagregátů, včetně nových sub-2 μm a ultravelkých pórů až 2000 Å. Dokument demonstruje výhody hydrofobně inertního povlaku, mechanickou stabilitu a široké molekulové rozmezí vhodné pro různé třídy bioterapeutik.

Použitá metodika a instrumentace

Metody SEC byly provedeny na nucených průtočných HPLC systémech Agilent Infinity 1260/1290/III s bioinertními čerpadly a UV a fluorescenční detekcí. Mobilní fáze obsahovaly fosforečnanové pufry s NaCl či bioinertními solemi. V práci byly použity kolony AdvanceBio SEC 1.9 μm (120–200 Å), 2.7 μm (130–1000 Å), Bio SEC-5 5 μm (2000 Å) a PROTEEMA diolové kolony (100–1000 Å).

Hlavní výsledky a diskuse

Ukázalo se, že menší částice (1.9 μm) nabízejí vyšší rozlišení a rychlejší analýzy při provozních tlacích až 620 bar. Hydrofobně inertní povlak minimalizuje sekundární interakce, čímž zajišťuje vysokou obnovu proteinů a konzistentní profil i po více než 1300 injekcích. Ultravětší póry (500, 1000 a 2000 Å) umožňují efektivní separaci velkých biomolekul jako jsou virus-like particles, mRNA či velké oligonukleotidy.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká reprodukovatelnost výsledků mezi kolonkami a laboratořemi
• Zkrácení doby analýzy až o polovinu díky kratším kolonkám a vyššímu tlaku
• Minimalizace opakovaných analýz díky dlouhodobé stabilitě sloupků
• Široké molekulové rozpětí vhodné pro peptidy, proteiny, AAV, VLP, LNP i oligonukleotidy

Budoucí trendy a možnosti využití

S rozvojem genové a buněčné terapie poroste poptávka po analýze komplexních a ultravelkých bioterapeutik. Vývoj nových stacionárních fází se zaměřením na ještě širší rozsahy pórů, vyšší provozní tlaky a kompatibilitu s hmotnostní spektrometrií otevře další možnosti charakterizace heterogenních biopolymerů. Digitalizace metod a automatizace výměny kolon dále zvýší throughput.

Závěr

Agilent AdvanceBio SEC a Bio SEC-5 kolony nabízejí robustní a univerzální řešení pro kvantifikaci monomerů, agregátů a fragmentů v bioterapeutikách. Vysoká rozlišovací schopnost, dlouhodobá stabilita a široké molekulové rozpětí podporují jak rutinní QC, tak pokročilé výzkumné aplikace.

Reference

Žádné explicitně uvedené literární odkazy v původním textu.