High-Speed Analysis of Itraconazole in Plasma Using Triple Quadrupole LC/MS/MS (LCMS-8050)

Význam tématu

Monitorování koncentrace itrakonazolu a jeho aktivního metabolitu hydroxyitrakonazolu v plasmě je klíčové pro terapeutické dávkování, farmakokinetické studie a kvalitu laboratorní kontroly. Rychlá a citlivá analýza umožňuje optimalizovat léčbu proti plísňovým infekcím a podporuje spolehlivost výsledků v klinickém i výzkumném prostředí.

Cíle a přehled studie / článku

Článek popisuje vývoj a validaci zkrácené LC–MS/MS metody pro kvantifikaci itrakonazolu a hydroxyitrakonazolu v lidské plasmě za použití vysokorychlostního trojitého kvadrupólu Shimadzu LCMS-8050. Cílem je dosáhnout rychlé analýzy (< 5 min), minimálního zatížení předúpravou a vysoké přesnosti a opakovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky:

• Objem plasmy: 50 µL
• Proteiny sráženy přidáním 100 µL acetonitrilu s interním standardem (itrakonazol-d3)
• Vortex → centrifugace (14 000 rpm, 4 °C, 10 min)
• Supernatant smíšen s 100 µL 1 % kyseliny octové ve vodě
• Injekce 3 µL do LC–MS/MS

Chromatografie:

• Kolona Shim-pack GIS (75×2,1 mm, 3 µm)
• Fáze A: 10 mmol/l acetát amonný ve vodě; fáze B: acetonitril
• Gradient: 65 % B (0–1 min), 95 % B (1,5–2,5 min), 65 % B (2,51–4,5 min)
• Průtok 0,4 mL/min, teplota kolony 40 °C, doba analýzy 4,5 min

MS/MS podmínky:

• Ionizace ESI v pozitivním módu, napětí +4,0 kV
• MRM tran­sice: itrakonazol 705,40→392,40; hydroxyitrakonazol 721,40→408,40; IS 710,40→397,35
• DL 300 °C, rozhraní a blok 400 °C, plynné toky: nebulizační 3 L/min, sušící 5 L/min, vytápěcí 15 L/min

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro oba analyty v rozsahu 10–1000 µg/mL vykázaly vynikající linearitu (r ≥ 0,999). Standardní vzorky:

• Přesnost v rozmezí 93,7–107,3 % (STD1–STD5)
• Opakovatelnost ≤ 2,07 % pro itrakonazol a ≤ 0,62 % pro hydroxyitrakonazol

QC vzorky (25, 250, 750 µg/mL):

• Přesnost 81,3–103,3 %
• Opakovatelnost ≤ 0,82 %

Výsledky potvrzují robustnost, vysokou přesnost i precizi jednoduché předúpravy založené na srážení proteinů bez nutnosti SPE.

Přínosy a praktické využití metody

Jednoduchá, nízkonákladová předúprava, krátká doba analýzy a vysoká citlivost umožňují využití metody v rutinním TDM, farmakokinetickém výzkumu a kontroly kvality léčivých přípravků obsahujících itrakonazol.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace předúpravy, rozšíření na další azolová antimykotika, aplikace v mikrosystémové chromatografii a integrace do klinických laboratorních sítí pro on-line monitorování léčby.

Závěr

Popsaná LC–MS/MS metoda nabízí rychlou, spolehlivou a přesnou analýzu itrakonazolu a hydroxyitrakonazolu v plasmě s minimální předúpravou, což podporuje její široké uplatnění v biomedicínském výzkumu a klinické praxi.