High-Speed Analysis of Sunitinib and Axitinib in Plasma Using Triple Quadrupole LC/MS/MS (LCMS-8050)

Význam tématu

Analytická detekce molekulárně cílených léčiv v biologických matricích je klíčová pro farmakokinetické studie, terapeutické monitorování a vývoj nových léčiv. Metody založené na kapalinové chromatografii spojené s hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS) nabízejí vysokou citlivost, selektivitu a rychlost rozboru, což umožňuje přesnou kvantifikaci i stopových koncentrací látek v komplexních vzorcích jako je lidská plazma.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo vyvinout a validovat jednoduchou, rychlou a cenově efektivní metodu pro současné stanovení inhibitorů kináz sunitinibu a axitinibu v lidské plazmě. Studie představuje příklad použití vysoce citlivého triple kvadrupólového spektrometru LCMS-8050 a deproteinizační přípravy vzorku bez nutnosti pevné fáze potvrzující vysokou přesnost i opakovatelnost analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy (50 μl) byly deproteinovány přidáním 100 μl vnitřního standardu (imatinib-d8) a 100 μl acetonitrilu, poté promíchány a odstředěny (15 000 rpm, 4 °C, 5 min). Supernatant se ředil 1:1 v 10 mmol/l močovinanu amonného a 5 μl bylo injektováno do LC-MS/MS.

Instrumentace:

• Kapalinový chromatograf: Shimadzu s kolonkou Shim-pack GIS (75 × 2,1 mm, 3 μm)
• Mobilní fáze A: 10 mmol/l močovina amonná ve vodě; B: methanol; gradient od 10 do 80 % B
• Průtok 0,3 ml/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 5 μl
• MS detektor: Shimadzu LCMS-8050, ESI pozitivní ionizace, MRM režim
• Parametry: napětí +4,0 kV, teploty DL 150 °C, rozhraní 300 °C, block heater 200 °C
• Proud nebulizačního plynu 3 l/min, sušícího plynu 5 l/min, ohřevu plynu 15 l/min

Hlavní výsledky a diskuse

Pro oba analyty a metabolit SU12662 byly získány lineární kalibrační křivky v rozsahu:

• Sunitinib: 3–300 μg/ml, korelace r≥0,999
• Axitinib: 0,3–30 μg/ml, korelace r≥0,999
• SU12662: 3–300 μg/ml, korelace r≥0,999

Přesnost byla v rozmezí 85–115 % a opakovatelnost (RSD) pod 10 % pro všechny QC úrovně. Reprezentativní chromatogramy pro oba analyty ukázaly dvě vrcholy odpovídající izomerům, jejichž sumární plocha byla použita pro kvantifikaci.

Přínosy a praktické využití metody

Díky jednoduché deproteinizační přípravě bez pevné fáze metoda výrazně zkracuje časové nároky a snižuje náklady analýzy. Vysoká citlivost a robustnost LCMS-8050 umožňuje spolehlivou kvantifikaci inhibitorů tyrosinkinázy v klinických studiích a farmakokinetických analýzách.

Budoucí trendy a možnosti využití

Trendem je další automatizace přípravy vzorku, zkrácení doby analýzy pomocí ultrarychlých kolonek a rozšíření multiplexních MRM metod na širší škálu onkologických i neonkologických molekul. Potenciál má také minimalizace objemu vzorku a integrace systémů pro živé sledování koncentrací v reálném čase.

Závěr

Popsaná metoda LC-MS/MS poskytuje rychlý, citlivý a ekonomický přístup k monitorování sunitinibu, axitinibu a jejich metabolitů v lidské plazmě. Splňuje požadavky na přesnost, lineárnost i opakovatelnost, je vhodná pro výzkum i preklinické a klinické farmakokinetické studie.

Reference

Shimadzu Application News C126, 2016
Spolupráce: Pharmaceutical Sciences Department, Tohoku University Hospital