Simultaneous Analysis of Immunosuppressive and Antifungal Drugs in Human Blood Plasma Using LC/MS/MS

Význam tématu

Tenzovaná kombinace imunosupresiv a antifungálních látek hraje klíčovou roli v péči o pacienty po transplantaci. Přesné sledování koncentrací mykofenolové kyseliny, vorikonazolu, itrakonazolu a jeho aktivního metabolitu hydroxyitrakonazolu v krevní plazmě umožňuje optimalizovat léčebné dávky, minimalizovat riziko rejekce štěpu i infekčních komplikací.

Cíle a přehled studie / článku

Primárním cílem bylo vyvinout a validovat rychlou, citlivou a selektivní metodu pro simultánní kvantifikaci imunosupresivního metabolitu mykofenolové kyseliny a dvou antifungálních látek včetně metabolitu v lidské plazmě pomocí LC-MS/MS triple kvadrupólu.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy (40 μL) byly deproteinovány přidáním interních standardů ve směsi acetonitril/metanol (90/10) a následnou centrifugací. Analytika proběhla na systému Nexera+ spojeném s LCMS-8050. Separace probíhala na kolóně Shim-pack Scepter C18 (50 mm×2,1 mm, 3 μm) s mobilními fázemi obsahujícími 10 mmol/l kyseliny mravenčí a 10 mmol/l formiátu amonného ve vodě (A) a v methanolu (B). Gradientní eluce (55→100→55 % B) při průtoku 0,45 ml/min, pevná teplota kolóny 40 °C, objem injekce 5 μl. Detekce v ESI pozitivním režimu pomocí MRM přechodů specifických pro jednotlivé látky.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala v rozsahu kalibrace (MPA 100–20 000 ng/ml, VRC 50–10 000 ng/ml, ITC/OH-ITC 5–1000 ng/ml) vynikající linearitu (r>0,998). Limit kvantifikace splňoval kritéria přesnosti a opakovatelnosti (100 ± 15 %, RSD<15 %). Matrixový efekt byl nepatrný a reálné vzorky pacientů ukázaly hladiny 270 ng/ml MPA, 1690 ng/ml ITC a 107 ng/ml OH-ITC bez významných interferencí.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlá a robustní metoda umožňuje high-throughput monitoring terapie kombinovanou léčbou, šetří čas i objem vzorku a usnadňuje terapeutický drug monitoring v klinických a farmaceutických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření panelu sledovaných látek, automatizace přípravy vzorků, integrace vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie, využití sušených kapkových vzorků a vývoj point-of-care přístrojů pro rychlé rozhodování v klinické praxi.

Závěr

Předložená LC-MS/MS metoda je spolehlivá, citlivá a vysoce selektivní pro simultánní analýzu imunosupresiva a antifungálních látek v lidské plazmě, vhodná pro rutinní terapeutický monitoring.

Reference

• Bioanalytical Method Validation: Guidance for Industry, US FDA, 2018
• Guideline on Bioanalytical Method Validation in Pharmaceutical Development, JP MHLW, 2013