Simultaneous Analysis of Immunosuppressive and Antifungal Drugs in Human Blood Plasma Using LC/MS/MS

Význam tématu

Monitorování imunosupresivních a antifungálních látek u transplantovaných pacientů je klíčové pro optimalizaci léčby a prevenci rejekce či infekcí. Simultánní analýza těchto sloučenin šetří čas i vzorek pacienta.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat metodu pro současné stanovení mykofenolové kyseliny (MPA), vorikonazolu (VRC), itrakonazolu (ITC) a jeho metabolitu hydroxyitrakonazolu (OH-ITC) v lidské plazmě pomocí LC–MS/MS.

Použitá instrumentace

• Systém: Nexera + LCMS-8050
• Kolona: Shim-pack Scepter C18 (50 mm × 2,1 mm, 3 µm)
• Mobile fáze A: voda s 10 mmol/L kyseliny mravenčí a 10 mmol/L formiátu amonného
• Mobile fáze B: methanol s 10 mmol/L kyseliny mravenčí a 10 mmol/L formiátu amonného
• Průtok: 0,45 mL/min, teplota kolony: 40 °C, objem injekce: 5 µL
• Ionizace ESI v pozitivním módu, napětí 4,0 kV, interface 300 °C, DL 250 °C, block heater 400 °C
• Průtoky plynů: nebulizační 3 L/min, sušící 5 L/min, ohřívací 15 L/min

Použitá metodika

40 µL plazmy bylo smícháno s 160 µL roztoku vnitřních standardů (MPA-d3, VRC-d3, ITC-d4, OH-ITC-d4), deproteinováno a po centrifugaci (10 000×g, 10 min) byl získaný supernatant v objemu 150 µL injikován do LC–MS/MS. Kvantifikace probíhala pomocí MRM přechodů cílových sloučenin.

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny sloučeniny vykázaly v rozsahu kalibrace R > 0,998. Limit kvantifikace (LLOQ) dosahoval 100 ng/mL pro MPA, 50 ng/mL pro VRC a 5 ng/mL pro ITC a OH-ITC. Přesnost (accuracy) byla v rozmezí 92–103 % a preciznost (%RSD) pod 15 %. Vliv matrice byl minimální (<±10 %) a ve vzorcích pacientů nebyly zjištěny interferenční piky.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé a citlivé sledování imunosupresivních a antifungálních látek v klinických a výzkumných laboratořích, zlepšuje terapeutický monitoring a podporuje kvalitativní kontrolu léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat rozšíření panelu analyzovaných sloučenin, automatizaci předepracování vzorků, vysokoprůchodové systémy a aplikaci vysokorozlišovací HRMS nebo MRM3 pro zvýšení selektivity.

Závěr

Validovaná LC–MS/MS metoda poskytuje spolehlivou, přesnou a citlivou simultánní analýzu MPA, VRC, ITC a OH-ITC v lidské plazmě a je vhodná pro klinické, farmakokinetické i QA/QC aplikace.

Reference

• Bioanalytical Method Validation: Guidance for Industry (US FDA, 2018)
• Guideline on Bioanalytical Method Validation in Pharmaceutical Development (JP MHLW, 2013)