Thermo Scientific™ UltiMate™ 3000 RSLCnano system with ProFlow™ technology

Význam tématu

Low-flow kapalinová chromatografie spojená s hmotnostní spektrometrií (LC-MS) je klíčová pro hloubkovou analýzu proteomických vzorků a komplexních biologických matric. Zvyšující se nároky na propustnost, citlivost a robustnost vyžadují optimalizovaná řešení, která umožňují rychlou a kvantitativní identifikaci proteinů a peptidů s minimálním prostojem a přenosem vzorku.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem představeného textu je demonstrovat schopnosti systému Thermo Scientific UltiMate 3000 RSLCnano vybaveného ProFlow technologií pro vysokopropustné nízkoprůtokové LC-MS aplikace. Studie představuje standardizované metody rozlišení pro rychlé i hloubkové proteomické analýzy, včetně testů na čistých odběrech plazmy a HeLa proteinových digestech.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika vychází z úprav gradientů pro různé průtoky (0,3–1,5 μl/min) a délky analýzy (8–60 min). Key parametry: využití MS (>75 %), minimální carryover, šířka píku v půl výšky (PWHM) 3–10 s a asymetrie < 1,3. Systém je spojen s Orbitrap Exploris 480 a EASY-Spray kapilární kolonkou (75 μm ID × 15 cm).

Hlavní výsledky a diskuse

• Propustnost: 24–180 vzorků za 24 hod podle délky gradientu.
  
• Využití MS: 95 % při 0,3 μl/min (60 min), 75 % při 1,5 μl/min (8 min).
  
• Identifikace z 200 ng HeLa digestu: až 3500 unikátních peptidů a 3164 proteinových skupin při 48 min; 1425 peptidů a 2252 proteinových skupin při 8 min.
  
• Proteomika plazmy: přibližně 265 proteinových skupin při 8 min, až 265 při 60 min; konzistentní výsledky během >200 měření za 3 dny.
  

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý přechod mezi hlubokými („deep dive“) a vysokopropustnými analýzami bez přestavby hardwaru.
  
• Vysoká reprodukovatelnost a minimální carryover vhodné pro klinickou a QA/QC praxi.
  
• Široký dynamický rozsah nad pěti řády koncentrací.
  

Budoucí trendy a možnosti využití

ProFlow technologie se očekává vylepšení o vyšší automatizaci, pokročilou datovou analýzu pro rychlé kvantitativní vyhodnocení a integraci s inteligentními systémovými nástroji pro real-time rozhodování. Rozšiřují se také možnosti multiplexních a multi-omics aplikací.

Závěr

UltiMate 3000 RSLCnano s ProFlow technologií nabízí vyvážené řešení pro rychlé i hloubkové proteomické analýzy. Kombinace vysoké propustnosti, citlivosti a robustnosti přináší významné přínosy pro akademické i průmyslové laboratorní aplikace.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific UltiMate 3000 RSLCnano system s ProFlow technologií
  
• Thermo Scientific EASY-Spray kolona 75 μm ID × 15 cm
  
• Thermo Scientific Orbitrap Exploris 480 mass spectrometer