LC-MS/MS Method for the Quantification of Budesonide in Human Plasma

Význam tématu

Glukokortikoidy představují klíčovou třídu steroidních hormonů s protizánětlivým účinkem. Budesonid se využívá zejména pro léčbu astmatu, alergické rýmy a kožních onemocnění. Nízká biologická dostupnost vyžaduje vysoce citlivé analytické metody schopné detekce v řádu pg/mL.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a validovat bioanalytickou LC-MS/MS metodu pro přesné stanovení budesonidu v lidské plasmě s lineárním rozsahem 2 až 1024 pg/mL. Metoda byla testována na systému SCIEX Triple Quad 5500+ – QTRAP Ready.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy s K2EDTA byly inokulovány budesonidem a interním standardem budesonid-D8. Po zředění byly analyty extrahovány na SPE Strata-X RP kartuších, eluovány methanolem, vysušeny a rekonstituovány v 40% acetonitrilu. Chromatografie proběhla na ExionLC AD s C18 kolonkou (100×2,1 mm, 1,7 µm) při 50 °C a průtoku 500 µL/min. Detekce byla vykonána na SCIEX Triple Quad 5500+ v pozitivním režimu ESI s následujícími klíčovými parametry: teplota 600 °C, napětí 3000 V, MRM přechody pro budesonid a budesonid-D8. Data byla zpracována v SCIEX OS-Q softwaru s váženou lineární regresí 1/x2.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LLOQ 2 pg/mL bez interferencí, robustní linearitu (r ≥ 0,99) v rozsahu 2–1024 pg/mL a vysokou přesnost (%CV ≤ 15 % nad LLOQ, ≤ 20 % na úrovni LLOQ). Chromatograficky se objevil jediný pík reprezentující oba epimery budesonidu. Optimalizovaná SPE extrakce významně snížila matrice a dosáhla požadované citlivosti.

Přínosy a praktické využití metody

• Velmi nízké LLOQ vhodné pro farmakokinetické a biofarmaceutické studie
• Vysoká robustnost a reprodukovatelnost pro rutinní laboratorní provoz
• Možnost rozšíření na další steroidní sloučeniny a bioanalytické aplikace

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace workflow ke zvýšení throughputu a minimalizaci chyb lidského faktoru
• Nasazení microflow a vysokorychlostní separace pro rychlejší analýzy
• Využití MRM3 pro vyšší selektivitu v komplexních matricích

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na systému SCIEX Triple Quad 5500+ poskytuje citlivé a spolehlivé stanovení budesonidu v lidské plasmě s LLOQ 2 pg/mL a širokým dynamickým rozsahem. Metoda je vhodná pro bioanalytické studie, dokumentaci farmakokinetiky a rutinní monitoring léčby.

Reference

1. Collins BA, Dima MA, Ivosev G, Zhong F (2013) A high dynamic range pulse counting detection system for mass spectrometry. Rapid Commun Mass Spectrom 28(2):209–216