Sub-Picogram Level Quantitation of Desmopressin in Small Volumes of Human Plasma Using a Trap-Elute Microflow

Význam tématu

Desmopressin je syntetický analog vasopressinu využívaný v klinické praxi při léčbě diabetes insipidus a enurézy. Jeho velmi nízké plazmatické koncentrace v řádu pikogramů vyžadují vysoce citlivé analytické metody, které minimalizují spotřebu vzorku a maximalizují přesnost a reprodukovatelnost kvantifikace.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout mikroflow LC-MS/MS metodiku umožňující stanovit desmopressin v lidské plazmě na hladině 0,5 pg/mL při 3× menším objemu vzorku ve srovnání s běžnou analytickou flow metodou. Studie porovnala výkon microflow a analytického flow přístupu na QTRAP 6500+ systému.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnovala extrakci desmopressinu ze 300 µL plazmy pomocí SPE sloučenin s slabou kationtoměnou (WCX), eluci 5 % kyselinou octovou v methanolu, sušení a re-suspendaci v 0,1 % kyselině octové. Chromatografie byla provedena v trap-elute režimu na M5 MicroLC systému (Phenomenex Luna trap column 20×0,3 mm a Phenomenex Kinetex XB-C18 kolona 50×0,3 mm) s průtokem 40 µL/min pro trap a 5 µL/min pro separaci. MS analýzu zajistil QTRAP 6500+ s OptiFlow Turbo V Source a MRM přechody optimalizované pro desmopressin a interní standard d5.

Použitá instrumentace

• SCIEX QTRAP 6500+ LC-MS/MS
• OptiFlow Turbo V Source se SteadySpray 25 µm elektrodou
• M5 MicroLC systém (trap-elute režim)
• WCX SPE kazety (Waters)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla dolní meze kvantifikace 0,5 pg/mL při spotřebě 300 µL plazmy. Kalibrační křivka v rozsahu 0,5–250 pg/mL vykazovala výbornou linearitu (r = 0,997). Přesnost (accuracy) se pohybovala v rozmezí 91,8–104,3 % a variační koeficient (CV) byl v souladu s FDA bioanalytickými kritérii (<15 %). Srovnání s analytickou flow metodou prokázalo, že microflow režim poskytuje shodnou citlivost při třikrát menší spotřebě vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá microflow LC-MS/MS metoda nabízí výraznou úsporu vzorku, vyšší ionizační efektivitu při nízkých průtocích a minimalizaci matrix efektu. Díky robusnímu zdroji OptiFlow Turbo V a trap-elute mikroflow platformě je možné rychlé a reprodukovatelné analýzy desmopressinu v klinických a farmakokinetických studiích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování zahrnuje další miniaturizaci průtočných cest, integraci automatizované přípravy vzorků, rozšíření na multiplexní stanovení peptidů a adaptaci metodiky pro preklinické a klinické farmakokinetické studie s požadavkem na extrémně nízké vzorkovací objemy.

Závěr

Byla úspěšně vyvinuta a ověřena citlivá microflow LC-MS/MS metoda pro kvantifikaci desmopressinu v lidské plazmě na úrovni 0,5 pg/mL. Metoda výrazně snižuje spotřebu vzorku, zachovává vysokou přesnost a linearitu a minimalizuje zdrojovou optimalizaci, což z ní činí vhodný nástroj pro bioanalytické a farmakokinetické aplikace.

Reference

1. Gudlawar SK, Pilli NR, Siddiraju S & Dwivedi J (2017) Highly sensitive assay for determination of therapeutic peptide desmopressin in human plasma by UPLC–MS/MS Journal of Pharmaceutical Analysis 7(3) 196–202
2. Baghla R, Guttikar S et al A Sub-picogram quantification method for desmopressin in plasma using the SCIEX Triple Quad 6500 System SCIEX Technical Note