Highly sensitive quantitative analysis of budesonide from plasma using LC/MS/MS

Význam tématu

BudESONID je syntetický glukokortikoid široce užívaný v léčbě astmatu, alergické rinitidy a kožních onemocnění. Díky rozsáhlé first-pass eliminaci má bio‐dostupnost kolem 10 %, což vyžaduje extrémně citlivou kvantifikaci v plasmě pro farmakokinetické a bioanalytické studie.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a validovat vysoce senzitivní LC/MS/MS metodu pro kvantitativní stanovení budesonidu v lidské plasmě. Studie využívá Shimadzu LCMS-8060 ve spojení s UHPLC systémem Nexera X2 a stabilním izotopovým interním standardem budesonid D8.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plasmatu byly upraveny pevnou fází (SPE):

• Podmínění kolonek: 1 mL methanolu, 1 mL vody
• Nanášení vzorku: 200 µL plazmy + interní standard
• Praní: 1 mL vody, 1 mL 5% methanolu
• Eluce: 1 mL methanolu

Roztoky byly vysušeny při 50 °C dusíkem a rekonstituovány v 200 µL mobilní fáze.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Shimadzu Nexera X2, kolona C18 (100×3 mm, 2,1 µm), gradient 40–90% akronitrilu při 0,4 mL/min
• MS/MS: Shimadzu LCMS-8060, triple kvadrupól, heated ESI s teplotou DL 250 °C, blok 400 °C, napájecí napětí 300 °C
• MRM přechody: budesonid 431,10→323,20; budesonid D8 439,10→323,20

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla dolní meze kvantifikace (LLOQ) 2 pg/mL s vynikajícím poměrem signál/šum a bez interferencí v blank plasmě. Kalibrace v rozsahu 2–200 pg/mL vykázala lineárnost s r2=0,9992. Precision a accuracy na úrovních LQC, MQC a HQC splňovaly bioanalytická kritéria (%RSD <7%).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivé stanovení budesonidu v biologických maticích při nízkých koncentracích. Je ideální pro:

• Farmakokinetické studie a bioekvivalenční testy
• Toxikokinetické a PK/PD studie u nízkých dávek
• Monitorování léčby a compliance pacientů

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může zahrnovat:

• Automatizaci přípravy vzorků a SPE
• Multiplexní analýzy dalších kortikosteroidů
• Integraci s vysoce citlivými ionizačními technikami (APCI, nano-ESI)
• Využití strojového učení pro validaci a kontrolu kvality dat

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda na systému Shimadzu LCMS-8060 umožňuje extrémně citlivé a spolehlivé stanovení budesonidu v plasmě s LLOQ 2 pg/mL. Díky ultra-rychlému skenování a heated ESI je metoda vhodná pro náročné bioanalytické aplikace.

Reference

[1] Deventer K., Mikulcikova P., Van Hoecke H., Van Eenoo P., Delbeke F.T. Detection of budesonide in human urine after inhalation by liquid chromatography–mass spectrometry. J. Pharm. Biomed. Anal. 2006;42:474–479.
[2] Streel B., Cahay B., Klinkenberg R. Using total error concept for the validation of liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the determination of budesonide epimers in human plasma. J. Chromatogr. B.