The Quantitative Power of SCIEX Triple Quad and the QTRAP® 6500+ LC-MS/MS System for the Bioanalysis of Biotherapeutics

Význam tématu

Se vzrůstajícím počtem bioterapeutik se zvyšuje i potřeba citlivých a spolehlivých bioanalytických metod. LC-MS/MS nabízí oproti tradičním ligandovým testům multiplexní možnosti, širší dynamický rozsah, vyšší specifičnost a selektivitu.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo ověřit kvantitativní výkonnost systémů SCIEX Triple Quad a QTRAP 6500+ pro analýzu peptidů ve vzorcích referenčního mixu i v biologické matrici (plazma) v pozitivním i negativním ionizačním režimu. Hodnoceny byly LLOQ, lineární dynamický rozsah, přesnost a opakovatelnost.

Použitá instrumentace

• ExionLC UHPLC s kolonkou bioZen Peptide XB-C18 (50×2,1 mm, 2,6 µm)
• SCIEX Triple Quad™ 6500+ a QTRAP® 6500+ LC-MS/MS
• IonDrive Turbo V Ion Source
• SCIEX OS Software 1.6.1

Použitá metodika

Referenční mix 6×5 peptidů byl ředěn v 5 % acetonitrilu/1 % kyseliny formiové. Plazma byla precipitována metanolem, potom digetována trypsinem a naředěna matricí. Chromatografie probíhala při 500 µL/min s gradienty optimalizovanými pro mix a plazmu. MS parametry (GS1, GS2, CUR, TEM, DP, CE, CXP) byly nastaveny zvlášť pro pozitivní i negativní ionizaci. Data zpracována v SCIEX OS pomocí algoritmu MQ4.

Hlavní výsledky a diskuse

• Referenční mix: lineární dynamický rozsah přes 5 řádů, R² ≈ 0,999, CV < 7 %, detekce isotopologií až při 0,0001× (S/N ~10).
• Plazma pozitivní režim: LDR až 5 řádů, LLOQ ~0,0104 ng/mL, CV < 14 %.
• Plazma negativní režim: LDR až 4,5 řádu, LLOQ ~0,0172 ng/mL, CV < 19 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost a široký dynamický rozsah podporují spolehlivou kvantifikaci bioterapeutik.
• Možnost analýzy v pozitivním i negativním režimu rozšiřuje spektrum analyzovatelných sloučenin.
• Rychlé zpracování dat v SCIEX OS zefektivňuje workflows ve výzkumu a QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace ion mobility pro lepší separaci komplexních vzorků.
• Rozvoj multiplexních kvantitativních metod pro několik biomarkerů současně.
• Využití umělé inteligence ke zrychlené a pokročilé analýze chromatografických a hmotnostních dat.

Závěr

Systémy SCIEX Triple Quad a QTRAP 6500+ prokázaly vynikající kvantitativní výkonnost při bioanalýze peptidů s nízkými LLOQ, širokým dynamickým rozsahem, nízkými CV a univerzálním použitím v obou ionizačních režimech.

Reference

• Ouyang Z. et al. Pellet digestion: A simple and efficient sample preparation technique for LC-MS/MS quantification of large therapeutic proteins in plasma. Bioanalysis. 2012;4(1):17–28.