Highly Sensitive LC-MS/MS Method for Quantification of Barnidipine in Human Plasma

Význam tématu

Barnidipin představuje novou generaci dihydropyridinových blokátorů vápníkových kanálů, užívanou v léčbě hypertenze díky vysoké afinitě ke svalovině cév a selektivitě k L-typovým kanálům. Nízké plazmatické koncentrace účinné látky vyžadují citlivé bioanalytické metody schopné měřit hladiny v rozsahu pikogramů na mililitr.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout a validovat vysoce citlivou kvantitativní metodu LC-MS/MS pro stanovení barnidipinu v lidské plazmě v rozsahu 5–8000 pg/mL. Jako vnitřní standard byl použit izotopově značený barnidipin-D5 a měření probíhalo na SCIEX QTRAP 6500+ spojeném s ExionLC AD.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek: 500 µL plazmy s 50 µL IS (barnidipin-D5) bylo upraveno přidáním 500 µL 2% H₃PO₄ a extrahováno SPE kartájem Bond Elut Plexa. Eluát byl vysušen N₂ a rekonstituován v 200 µL mobilní fáze.
Chromatografie: Phenomenex Luna HILIC (150 × 4,6 mm, 3 µm), tok 500 µL/min, isokratická eluence 80% 2 mM amonium formiátu (pH 4) a 20% acetonitril. Teplota kolony 40 °C, injekce 10 µL.
MS/MS: Pozitivní ESI režim, MRM detekce (Q1/Q3 u barnidipinu 492,2 → 315,1; u D5 497,2 → 315,1), zdrojová T 600 °C, GS1/GS2 60, napětí 3200 V, dwell 200 ms. Kvantifikace pomocí vážené lineární regrese 1/x².

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární rozsah 5–8000 pg/mL v plazmě (r > 0,99) a LOD 0,1 pg/mL v čistém roztoku. Obnova analyzátu přesáhla 80 % na všech QC úrovních. Preciznost (%CV) byla ≤20 % u LLOQ a ≤15 % u ostatních hladin, přičemž přesnost se pohybovala mezi 99–101 %.

Přínosy a praktické využití metody

Menší objem plazmy (500 µL) a konečná rekonstituční objem 200 µL umožňují vícenásobné analýzy nebo opakované injekce vzorků v regulovaných bioanalytických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k dalšímu snížení detekční meze, automatizaci přípravy vzorků a rozšíření aplikace na multi-analyzní bioanalýzy kombinujících barnidipin s dalšími antihypertenzivy.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na systému SCIEX QTRAP 6500+ s ExionLC AD je vysoce selektivní, citlivá a robustní pro stanovení barnidipinu v lidské plazmě s LLOQ 5 pg/mL, splňující požadavky USFDA pro bioanalytické studie.

Použitá instrumentace

• SCIEX QTRAP 6500+ s IonDrive Turbo V source a IonDrive QJet
• ExionLC AD System
• Phenomenex Luna HILIC 150 × 4,6 mm, 3 µm kolona
• Analyst software 1.6.3

Reference

1. Talari GP, Kumar VK (2019) Simultaneous Estimation and Validation of LC-MS Method for Determination of Barnidipine in Human Plasma: RASAYAN J. Chem. 12(1):389–401
2. Delhira N, Anbazhagan S (2015) A Simple, Isocratic and Ultra-Fast Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Method for the Estimation of Barnidipine in Human Plasma. Pharm Anal Acta, 6:7