Analysis of GLP-1 Agonists Using the Agilent 1290 Infinity II Bio LC System and Altura Ultra Inert HPLC Column

Význam tématu

Analýza GLP-1 receptorových agonistů patří k zásadním úkonům v biotechnologickém a farmaceutickém průmyslu. Tyto syntetické peptidy se uplatňují v léčbě diabetu a regulaci glykémie, přičemž i drobné nečistoty či degradované formy mohou ovlivnit jejich bezpečnost a účinnost. Hydrofobní charakter a tendence ke kovalentnímu či nespecifickému navázání na kovové povrchy nasazují požadavky na biokompatibilní a inertní chromatografické systémy s vysokou rozlišovací schopností.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo ověřit výkonnost Agilent 1290 Infinity II Bio LC systému ve spojení s Ultra Inert Altura Peptide Plus HPLC kolonou pro separaci a kvantitativní analýzu dvou GLP-1 agonistů – tirzepatidu a retatrutidu. Studie zahrnovala LC-UV měření pro hodnocení chromatografické účinnosti a tvaru píků a následné LC-MS analýzy k potvrzení hmotnostních vlastností hlavních peptidů a nečistot.

Použitá metodika a instrumentace

Pro zajištění minimálních nespecifických interakcí byly uplatněny následující podmínky:

• Kapalinová chromatografie: Agilent 1290 Infinity II Bio LC System s biokompatibilní průtokovou cestou
• Kolona: Altura Peptide Plus, 2,1 × 150 mm, 2,7 µm, Ultra Inert povlak
• Mobilní fáze A: 0,1% kyselina mravenčí ve vodě; mobilní fáze B: 0,1% kyselina mravenčí v acetonitrilu
• Gradient: lineární přechod z 20 % B na 60 % B během 20 min, návrat do výchozích podmínek; teplota kolony 55 °C, průtok 0,4 mL/min
• Detekce UV: 214 nm, 220 nm a 280 nm
• MS: Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF v pozitivním iontovém režimu, dual AJS ESI; rozsah 100–1700 m/z
• Vzorky: tirzepatid a retatrutid (1 mg/mL), kontrolní i termálně stresované (85 °C, 3 h)

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatografie na Altura koloně vykázala ostré a symetrické píky s nízkým rozptylem plochy (RSD 0,7–1,2 %) a minimálním tailem (faktor 0,83–0,9). Rozlišení hlavního peptidu od vedlejších nečistot bylo kompletní a reprodukovatelné. Po termálním stresu se objevily nové piky degradovaných produktů s nízkou intenzitou, jejichž vrcholy byly jasně oddělené od hlavního signálu. LC-MS dekonvoluce potvrdila molekulové hmotnosti 4813,68 Da pro tirzepatid a 4731,54 Da pro retatrutid a identifikovala vedlejší izomery a příměsi ve stopové koncentraci.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká účinnost a reprodukovatelnost separace hydrofobních peptidů
• Minimalizace nespecifických vazeb díky inertním povlakům a biokompatibilnímu LC systému
• Citlivá detekce nečistot a degradovaných forem pro účely QA/QC a forenzní stability
• Kompatibilita s UV a MS detekcí umožňuje komplexní charakterizaci výrobku

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření aplikace na další terapeutické peptidy a bílkovinné fragmenty
• Integrace s vysokorozlišovacími hmotnostními spektrometry pro detailní proteomické studie
• Automatizované pracovní postupy a online monitoring stability během výroby
• Vývoj nových inertních materiálů pro ještě vyšší odolnost vůči adsorpci

Závěr

Studie prokázala, že kombinace Agilent 1290 Infinity II Bio LC systému a Ultra Inert Altura Peptide Plus kolony poskytuje spolehlivou, citlivou a reprodukovatelnou platformu pro analýzu GLP-1 receptorových agonistů. Metoda je ideální pro rutinní kontroly kvality, separaci nečistot i forcenou degradaci.

Reference

• Müller T. D. et al. Glucagon-Like Peptide 1 (GLP-1). Mol. Metab. 2019, 30, 72–130.