Workflow Solutions for Peptide Therapeutics - Application Compendium

Význam tématu

Peptidová terapeutika představují rostoucí třídu léčiv se širokým spektrem biologické aktivity, zejména GLP-1 agonisté pro léčbu cukrovky 2. typu a obezity. Přesná a spolehlivá analýza těchto molekul je nezbytná pro zajištění jejich kvality, účinnosti a bezpečnosti. Moderní analytické přístupy umožňují detailní charakterizaci identity, čistoty, strukturních modifikací i degradace peptidů, což je zásadní pro vývoj i výrobní kontrolu.

Cíle a přehled studie / článku

Tento kompendium shrnuje pracovní postupy (workflows), aplikační poznámky a přístrojová řešení společnosti Agilent pro vývoj, charakterizaci a kontrolu peptidových léčiv. Obsah zahrnuje:

• Metody syntetické a rekombinantní přípravy peptidů
• Úskalí analýzy GLP-1 analogů (liraglutid, semaglutid, tirzepatid aj.)
• Klíčové testy pro identifikaci, čistotu, strukturní integritu a biologickou aktivitu
• Příklady aplikací a případové studie: měření složení aminokyselin, agregace, stability, kvantifikace, identifikace surovin

Použitá metodika a instrumentace

Kompendium uvádí ucelený přehled analytických technik:

• Kapalinová chromatografie (RP-LC-UV, LC/MS, 2D-LC)
• Spektroskopie (Raman, FTIR, UV-Vis)
• Hmotnostní spektrometrie (Q-TOF, triple quadrupole LC/MS, TOF, Q-TOF s ExD buňkou)
• Gaskromatografie (GC, GC-MS, HS-GC)
• Iontová chromatografie a ICP-MS pro stopové prvky
• Velikostní exkluzní chromatografie (SEC) pro profiling agregátů
• IM/MS pro analýzu izomerizace a konformačních variant
• Biologické testy (bioassay, buněčné testy, HCP analýza)
• Automatizace přípravy vzorků (AssayMAP Bravo)

Klíčové přístroje Agilent zahrnují 1260/1290 Infinity II a III LC systémy, bio-inertní LC, InfinityLab LC/MSD, 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF, 6495D TQ-MS, 7900 ICP-MS, 8890 GC/5977 MSD, Vaya Raman, Cary FTIR a další.

Hlavní výsledky a diskuse

Kompendium demonstruje:

• Škálování analytických metod z analytické na preparativní RP-LC pomocí PLRP-S kolony s přímým přenosem gradientu
• Detailní sekvenční analýzu GLP-1 analogů pomocí ECD a ExDViewer, která umožňuje míření izomerů (aspartát vs isoaspartát)
• Profil degradovaných produktů po stresových podmínkách (kyselé, zásadité, oxidační) s dekonvoluční analýzou intact mass
• Kvantifikaci native i monooxidovaných peptidů (tirzepatid) metodou MRM s LOQ v ng/mL oblasti
• Charakterizaci agregátů liraglutidu a semaglutidu pomocí bio 2D-LC a MS kompatibilního rozpouštědla s aktivní modulací
• Rychlou verifikaci molekulové hmotnosti GLP-1 analogů na LC/MSD iQ bez složitého vývoje metod
• Efektivní ověření surovin Fmoc-aminokyselin Ramanovou spektroskopií skrz obal

Přínosy a praktické využití metody

Popisované pracovní postupy a přístrojové konfigurace umožňují

• Rychlý vývoj a transfer analytických metod mezi laboratořemi
• Kvalitní kontrolu API v souladu s USP/ICH požadavky
• Citlivou detekci a kvantifikaci stopových a process-related nečistot
• Detailní potvrzení struktury, post-translačních modifikací a agregace
• Zrychlení výzkumu a vývoje díky automatizaci a integrovaným řešením

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj analytiky peptidů bude směřovat k:

• Vyšší integraci LC/MS s umělou inteligencí pro automatickou interpretaci dat
• Nasazení nativní MS a iontových mobilitních technik pro studium konformací
• Rozšíření online a in-line QC řešení v průmyslových provozech (PAT)
• Pokročilým bioanalytickým platformám pro multiplexní stanovení v biologických matricích
• Komplexnímu řízení dat a dokumentaci prostřednictvím LIMS/ELN systémů

Závěr

Toto Agilent kompendium poskytuje komplexní přehled nástrojů, metodologií a pracovních postupů pro analýzu peptidových léčiv, zejména GLP-1 agonistů. Kombinací špičkové instrumentace, robustních metod a automatizace se zvyšuje spolehlivost výsledků, urychluje vývoj i výrobní kontrola a splňují se přísné regulatorní požadavky.

Reference

1. Biological Activities of GLP-1. omicsonline.org