Detailed study into ASO impurity analysis, lessons learned, and myths dispelled while moving to compliant platform methods

Význam tématu

Analýza oligonukleotidů, zejména antisense oligonukleotidů (ASO), získala v posledních letech na významu s rozvojem nových terapeutických modalit. Přesná detekce a kvantifikace nečistot je klíčová pro zajištění kvality léčivých přípravků, splnění regulatorních požadavků a důvěry v klinická data.

Cíle a přehled článku

Cílem studie bylo odhalit a vyvrátit běžné mýty spojené s iontově párnou reverzní fází (IPRP) v kombinaci s hmotnostní spektrometrií vysokého rozlišení (HRMS) pro analýzu ASO. Autoři představili validní, plně automatizovanou GLP-platformu se softwarem Chromeleon 7.3.2 pro identifikaci, dekonvoluci a relativní kvantifikaci produktů a jejich nečistot.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci sloužila RP-UHPLC kolona Thermo Scientific DNAPac RP (2,1×100 mm, 4 µm) na Vanquish Flex UHPLC s čistými chemikáliemi (HFIP, pentylamin) v bezskleněném systému. Měření nečistot proběhlo na Orbitrap Exploris MS řízeném Chromeleon 7.3.2.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace podmínek zdroje umožnila odstranit aminosoli a kovové addukty bez významné in-source fragmentace až do 70 eV. Snížením aduktů se výrazně zlepšila čistota dat a srozumitelnost chromatogramů. Výsledky ukazují, že kvantifikace pomocí dekonvoluce je srovnatelná s extrakcí iontových chromatogramů (XIC) pro různé stavové nabití (např. z = –4, –5, –6). Automatická anotace v Chromeleon dovolila rychlou identifikaci plnohodnotných produktů (FLP) i nízkomolekulárních nečistot (N-x).

Přínosy a praktické využití metody

• Spolehlivé odstranění aduktů bez generování falešných fragmentů
• Automatizovaná GLP-kompatibilní reakční cesta (reporting, tabulky, dekonvoluce, XIC, UV)
• Možnost přidání nových cílových složek do analytické tabulky
• Kompatibilita s různými ASO přípravky a opakovatelnost výsledků

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší využití umělé inteligence pro inteligentní výběr nábojových stavů a detekci nových nečistot, rozvoj nových iontově párných činidel a materiálů kolony pro lepší rozlišení, a plná integrace GLP-systémů s elektronickou dokumentací. Další oblasti zahrnují vyšší citlivost MS metod, miniaturizaci a rychlé screeningové protokoly pro průmyslovou výrobu.

Závěr

Popsaná platforma spojuje optimalizovanou IP-LC HRAM MS metodiku, inteligentní dekonvoluci a XIC kvantifikaci v homogenním softwarovém prostředí. Výsledkem je spolehlivá, plně auditovatelná analýza ASO nečistot, která splňuje požadavky moderního farmaceutického výzkumu i výroby.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific DNAPac RP kolona, Vanquish Flex Binary UHPLC
• MS: Thermo Scientific Orbitrap Exploris s Chromeleon 7.3.2
• Softwarové nástroje: Chromeleon Reporting Engine 2.0, funkce dekonvoluce, XIC, GLP reporting