Method considerations for therapeutic ASO RNA analysis. Adducts and insource impurity generation

Význam tématu

Analýza terapeutických ASO RNA oligonukleotidů je zásadní pro zajištění kvality a bezpečnosti syntetických RNA léčiv. Přesná detekce a kvantifikace nečistot během výroby je klíčová pro vývoj nových oligonukleotidových terapií.

Cíle a přehled studie

• Vyvinout novou LC-HRMS metodu pro rychlou a citlivou analýzu nečistot ASO RNA a siRNA
• Odstranit amonné a kovové addukty a minimalizovat in-source impurity
• Zavést plně automatizované GLP kompatibilní workflow vhodné pro QC i výzkum

Použitá metodika a instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Flex Binary system s DNAPac RP kolonu
• Eluentní systém s hexafluorizovanou isopropanolovou kyselinou (HFIP) a aminy pro potlačení aduktů
• MS: Orbitrap Exploris 240 a MX mass spectrometer s optimalizovanými podmínkami zdroje
• Softwarové nástroje: BioPharma Finder v5.2 pro identifikaci se sliding windows Xtract a Chromeleon 7.3.2 pro GLP reportování

Hlavní výsledky a diskuse

• Optimalizované eluenty eliminují amonné i kovové addukty bez ztráty chromatografického rozlišení
• Vhodná nastavení MS zdroje nevedou ke vzniku in-source impurit
• Isotopická dekonvoluce poskytuje RSD pod 0.4 % pro primární produkt a pod 6 % pro nízké úrovně nečistot
• Lineární odezva a absence potlačení signálu potvrzeny kalibračními křivkami

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a spolehlivá identifikace a kvantifikace nečistot v ASO RNA
• Plně automatizované a GLP kompatibilní řešení vhodné pro rutinní QC i vývoj
• Vyšší citlivost a rozlišení oproti nízkorizolucním MS technikám

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace pokročilých algoritmů pro dekonvoluci izotopických spekter
• Uplatnění metody v analýze biologických vzorků a stability léčiv
• Rozšíření softwarových nástrojů pro automatickou identifikaci neočekávaných nečistot

Závěr

Navržená LC-HRMS metoda s Orbitrap Exploris 240 a MX systémem přináší robustní, rychlou a plně automatizovatelnou analýzu nečistot ASO RNA. Eliminace aduktů a minimalizace in-source impurit společně s GLP kompatibilním workflow poskytují spolehlivou kontrolu kvality syntetických RNA léčiv.

Reference

1. Vanhinsbergh C J Criscuolo A N Sutton et al Analytical Chemistry DOI1021ACSANALCHEM2C00765
2. Rentel C Gaus H Bradley et al Nucleic Acid Therapeutics DOI1089NAT20210056