Extended lifespan of innovative column assemblies in low-flow ion sources

Význam tématu

Robustní a reprodukovatelná dlouhodobá analýza v LC–MS proteomice je klíčová pro zpracování velkých souborů vzorků, minimalizaci odstávek a zajištění vysoké kvality dat. Vývoj kolonek a emitovacích sestav s prodlouženou životností umožňuje konzistentní výsledky i po tisícovkách injekcí.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na hodnocení stability a reprodukovatelnosti nové kombinace kolonek a emitovacího systému (Thermo Scientific µPAC Neo HT a PepMap Neo s OptiSpray zdrojem) při analýze standardizovaných diges­tů HeLa buněk a lidské plasmy během stovek až tisíců injekcí.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorků: Digesty HeLa buněk a plasmy s použitím S-Trap digesce a standardních protokolů (redukce, alkylace, trypsin).
• UHPLC: Vanquish Neo s pumpou pro nízký průtok 0,1–2,5 μL/min.
• Kolonky: OptiSpray µPAC Neo HT (300 μm) a PepMap Neo 75 μm × 15 cm s FAIMS Pro Duo a trap cartridge.
• Mass spectrometrie: Orbitrap Exploris 480 pro DDA a Exploris 240 pro DIA.
• Software: Proteome Discoverer 3.1/CHIMERYS, Spectronaut 19, Skyline directDIA.

Hlavní výsledky a diskuse

• HeLa digest na µPAC Neo HT: přes 2000 injekcí se pokles identifikací proteinů a peptidů pod 10 % při CV 2,1 % (proteiny) a 2,0 % (peptidy).
• Plasma digest na µPAC Neo HT: stabilní ID s CV <0,6 % pro proteiny a <0,5 % pro peptidy během >200 injekcí.
• HeLa na PepMap Neo 75 µm: 500 injekcí, RT CV <0,7 % a peak area CV <11 %.
• Udržení konstantního pozicování emitátoru eliminovalo významné variace mezi běhy i po reinstalaci.
• Maximální nárůst backpressuru byl kontrolovaný a nevedl k degradaci kvality chromatogramů.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoce průchodný proteomický screening stovek až tisíců vzorků bez nutnosti časté výměny kolonky.
• Snížení prostoje laboratoře a spotřeby materiálu při zachování kvality dat.
• Možné uplatnění v QA/QC, klinických studiích a farmaceutickém vývoji.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další optimalizace materiálů kolonek a emitátorů pro ještě delší životnost.
• Automatizace přepínání a optimalizace polohy zdroje pro různé MS platformy.
• Rozšíření na další komplexní matice (tkáňové lysáty, exozomy).

Závěr

Vyvinuté OptiSpray sestavy s µPAC Neo HT a PepMap Neo pro nízkoprůtokové LC–MS prokázaly vysokou stabilitu a reprodukovatelnost při dlouhodobém provozu. Metoda umožňuje zpracování rozsáhlých proteomických studií s minimálním servisem a zachováním kvality dat.

Reference

Žádné referenční citace nebyly uvedeny.