Leprechaun

Význam tématu

Charakterizace lentivirových vektorů a exozomů je klíčová pro vývoj genové terapie, monitorování bioprodukčních procesů a analýzu extracellularních vezikul. Spolehlivá kvantifikace titru, velikosti, struktury a obsahové integrity zajišťuje konzistentní kvalitu a bezpečnost biologických přípravků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem představeného systému Leprechaun je umožnit komplexní analýzu lentivirových částic a exozomů bez nutnosti předchozího čištění vzorku. Systém kombinuje zachycení částic, interferometrické měření velikosti a imunofluorescenční detekci pro rychlý a přesný výstup dat z 1–25 μl vzorku během několika hodin.

Použitá metodika a instrumentace

Systém Leprechaun využívá modul Luni pro zachycení a analýzu jednotlivých částic. K detekci velikosti se používá interferenční reflektanční mikroskopie (IRM) s rozsahem měření 35–200 nm a ≤5 % chybou. Imunofluorescenční analýza probíhá pomocí LED zdrojů (470, 567, 623 nm) a vědecké CMOS kamery s přesností fluorescence ≤5 %. Instrument se ovládá prostřednictvím počítače s Windows 11.

Hlavní výsledky a diskuse

Systém přesně kvantifikoval lentivirové částice v rozmezí 1×10^7–5×10^8 vp/mL, detekoval podíl částic s intaktním kapsidem a RNA a rozlišil agregáty a kontaminanty (extrakulární vezikuly, volný p24). U exozomů bylo dosaženo měření koncentrace 5×10^6–5×10^8 part./mL při jedné hodině inkubace a fenotypizace čtyř markerů současně. Imunofluorescence potvrdila přítomnost povrchových i vnitřních markerů s vysokou selektivitou.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimalizace přípravných kroků a zjednodušení workflow bez nutnosti předčištění.
• Rychlá zpětná vazba pro optimalizaci výroby lentivirů a exozomů ve QA/QC.
• Možnost sledování kvality vstupního materiálu (RNA obsah, p24 kontaminace) již v počátečních fázích.
• Měření exozomů z různých biofluid bez potřeby izolace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj se zaměří na rozšíření multiplexních analýz, zvýšení citlivosti detekce subpopulací a integraci softwarové analýzy pro automatizovanou validaci dat. Personalizované testy s vlastními protilátkami otevřou cestu k novým aplikacím v diagnostice a výzkumu biomarkerů. Využití v klinických laboratořích a regulačních procesech podpoří širší adopci technologie.

Závěr

Systém Leprechaun představuje inovativní platformu pro komplexní biofyziologickou charakterizaci lentivirů a exozomů včetně titru, struktury a fenotypu. Díky kombinaci interferometrie a imunofluorescence poskytuje rychlá a spolehlivá data i z hrubých vzorků, což významně urychluje vývoj a kontrolu biologických přípravků.

Reference

• Nejsou k dispozici.