Stunner AAV & AdV Characterization

Význam tématu

Charakterizace virových vektorů, jako jsou adeno-asociované viry (AAV) a adenoviry (AdV), je klíčová pro vývoj genové terapie, očkovacích látek i QC procesů ve výrobě biologických léčiv. Přesná kvantifikace celkových a funkčních částic, poměru plných a prázdných kapsid či agregace umožňuje zajistit bezpečnost, účinnost a reproducibilitu virových přípravků.

Cíle a přehled studie / článku

Představený systém Stunner kombinuje tři analytické techniky (UV/Vis, DLS, SLS) pro AAV a rozšiřuje je o multiúhlovou či otočnou DLS (RADLS) a MALS pro AdV. Cílem je dosáhnout rychlé, bezobarvovací a bezstandardní metody s minimálním objemem vzorku (2 µl) a vysokou propustností (96 vzorků/h).

Použitá metodika a instrumentace

Microfluidická platforma se dvěma pevnými optickými drahami (0,1 mm a 0,7 mm) zajišťuje rozsah absorbance 0,03–275 OD při 230–750 nm. DLS a SLS měří dynamické a statické rozptylové signály u AAV, zatímco RADLS (rozmezí úhlů 30–42° a 110–162°) a víceúhlový MALS poskytují rozlišení velikosti a agregace u AdV.

Hlavní výsledky a diskuse

• Pro AAV: detekce celkového titru až do 10^12 vg/mL, stanovení poměru plných/prázdných kapsid (přibližně 72 % plných, 28 % prázdných, poměr 0,38).
• Pro AdV: citlivost do 10^9 cp/mL, poměr plných a prázdných kapsid ~82 %/18 %, poměr 0,22.
• Rychlá automatizovaná analýza 96 vzorků za hodinu bez potřeby ředění, značení či standardů.
• Detekce a kvantifikace agregátů, stanovení hydrodynamického průměru a polydisperzity.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální spotřeba cenných virových přípravků (2 µl).
• Zkrácená doba analýzy a vysoká propustnost vhodná pro vývoj i rutinní QC.
• Automatizace a možnost integrace s robotickými systémy.
• Bezlabelová, bezbarvivová a bezstandardová práce s daty – systém automaticky dekonvoluuje spektra a vypočítá titry proteinů i nukleové kyseliny.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozšíření multiúhlového rozptylu a pokročilá datová analýza pro hlubší charakterizaci virových částic.
• Integrace s dalšími separačními metodami (chromatografie, kapilární elektroforéza) pro komplexní profilování vzorků.
• Implementace AI-driven algoritmů pro predikci stability a kvality vektorů.
• Standardizace postupu a certifikace metodiky v rámci regulovaných laboratoří (21 CFR Part 11).

Závěr

Systém Stunner nabízí komplexní, rychlou a vysoce přesnou platformu pro kvantifikaci a charakterizaci AAV i AdV z minimálních objemů vzorku. Spojení UV/Vis spektrofotometrie s rozptylem světla umožňuje bezproblémovou automatizovanou analýzu vhodnou pro vývoj a rutinní kontrolu kvality genových vektorů.