The UPLC-MS/MS Analysis of Urine Free- Metanephrines for Clinical Research

Význam tématu

Analýza volných metanéfrinů v moči představuje klíčový nástroj v klinickém výzkumu neuroendokrinních nádorů, zejména feochromocytomů. Volné metanéfriny poskytují specifický biomarker pro produkci katecholaminů nádorem a eliminují potřebu dekonjugace sulfatových forem, což zjednodušuje přípravu vzorku a zvyšuje klinickou přesnost.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl demonstrovat rychlou, citlivou a kvantitativně spolehlivou metodu UPLC-MS/MS pro stanovení volných metanéfrinů (metanefrin, normetanefrin, 3-methoxytyramin) v lidské moči určenou pro klinický výzkum. Metoda kombinuje reverzní chromatografii s mixed-mode SPE přípravou vzorku a detekcí na triplovém kvadrupólu Xevo TQ-XS IVD.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky neacidifikované moči byly zpracovány pomocí Oasis WCX SPE µElution desek (2 mg, 30 µm). Eluce analyty proběhla 85% acetonitril + 1% kyselina mravenčí. Suché extrakty byly rekonstituovány v 500 µl vody.

• UPLC soustava: ACQUITY UPLC I-Class FTN s kolonkou HSS PFP (2.1×100 mm, 1.8 µm), 35 °C
• Mobilní fáze: voda a acetonitril s 0.1% kyselinou mravenčí, gradientový běh 5 min
• MS/MS detekce: Xevo TQ-XS IVD, ESI+ režim, MRM přechody pro každý analyzát
• Softwarové řízení a kvantifikace: MassLynx a TargetLynx

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografické rozlišení metanefrinu, normetanefrinu a 3-MT při časovém rozlišení 5,5 minuty.
• Lineární kalibrační křivky v rozsazích 14–11 941 nmol/l (metanefrin), 27–11 031 nmol/l (normetanefrin), 43–7 385 nmol/l (3-MT), r2 > 0,99.
• Obnova spíkovaných vzorků 88–117 %, intra-i inter-asay preciznost ≤ 10,7 % CV respektive ≤ 4,0 % CV.
• Minimální carry-over, stabilita extraktů až 48 h při 4 °C.
• Málo významné matricové efekty kompenzované interním standardem.
• Výsledky vynikající shoda s RCPA Quality Assurance Scheme (Deming fit, Bland-Altman).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje přímé stanovení volných metanéfrinů bez hydrolytické dekonjugace, což zkracuje dobu přípravy a snižuje chemické zásahy. Vysoká citlivost a robustnost UPLC-MS/MS umožňuje široké uplatnění v klinickém výzkumu stresově indukovaných změn katecholaminů a v monitorování neuroendokrinních tumorů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření validace metody pro rutinní diagnostické použití v klinických laboratořích.
• Automatizace přípravy vzorků pro vysokoprůtokové screeningové aplikace.
• Adaptace podobných postupů na další polarizované metabolity a biomarkery.
• Integrace pokročilých algoritmů pro zpracování dat a umělé inteligence pro zvýšení přesnosti interpretace výsledků.

Závěr

Popsaná UPLC-MS/MS metoda pro stanovení volných metanéfrinů v moči nabízí rychlý, citlivý a precizní postup s minimálními matricovými interferencemi. Díky vysoké lineárnosti, přesnosti a shodě s externími schématy kvality je vhodná pro klinický výzkum neuroendokrinních poruch a má potenciál pro rozšíření do rutinní diagnostiky.

Reference

• Žádné externí literární odkazy.