Reversed-phase UPLC-MS/MS Analysis of Plasma Catecholamines and Metanephrines For Clinical Research

Význam tématu

Plazmatické katecholaminy a metanefriny jsou klíčové biomarkery pro diagnostiku a výzkum neuroendokrinních onemocnění, jako je feochromocytom či hypertenze spojená s nadměrnou produkcí katecholaminů.

Cíle a přehled studie

Popis rychlé a robustní metody pro kvantitativní stanovení katecholaminů a metanefrinů v lidské plazmě pomocí reverzní fáze UPLC-MS/MS. Hlavním cílem je zajistit vysokou citlivost, přesnost a minimální matriční efekty při zachování krátkého času analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorky plazmy (250 µL) stabilizovány 50 mM acetátem amonným s interním standardem.
• Extrakce: Oasis WCX µElution 96-jamková deska, eluce 2×50 µL metanol/2 % kyselina mravenčí.
• Rekonstrukce: 50 µL směsi voda:acetonitril:kyselina mravenčí (97:2:1).
• Chromatografie: ACQUITY UPLC I-Class PLUS se sloupcem HSS PFP (1,8 µm; 2,1×100 mm), gradient 2–90 % organické fáze za 2 min, průtok 0,5 mL/min.
• Detekce: Xevo TQ-S micro MS ve MRM režimu, pozitivní ionizace.
• Unikátní ionizace: UniSpray zvyšuje signál až pětinásobně oproti ESI.

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární kalibrační křivky až do 20 000 pg/mL, R² > 0,999.
• Mezi- a vnitrobatchové CV < 11 % na úrovni LOQ (1–10 pg/mL).
• Bazální rozlišení epinefrinu a normetanefrinu klíčové pro eliminaci vzájemného rušení.
• Extrahční výtěžky konzistentní napříč pěti šaržemi plazmy, matriční efekty minimalizovány.
• Celkový čas analýzy < 4 min od injekce k injekci.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchý a rychlý workflow bez přenosu vzorku po iniciální přípravě.
• Vysoká přesnost a preciznost vhodná pro klinické výzkumné aplikace.
• Možnost implementace v laboratořích bez potřeby HILIC LC konfigurace.
• Univerzální použití pro stanovení široké škály katecholaminů a jejich metabolitů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další zlepšení citlivosti pomocí pokročilých ionizačních technik a SLIM technologií.
• Automatizace přípravy vzorků a vysokorozlišené hmotnostní spektrometrie pro identifikaci nových biomarkerů.
• Integrace s datovými analýzami strojového učení pro rutinní screening a personalizovanou medicínu.

Závěr

Reverzní fáze UPLC-MS/MS metoda s použitím Oasis WCX µElution, HSS PFP kolony a UniSpray ionizace nabízí rychlé, citlivé a spolehlivé stanovování katecholaminů a metanefrinů v plazmě. Díky vynikající linearitě, přesnosti a nízkým matričním efektům je vhodná pro náročné klinické výzkumné aplikace.

Reference

Danaceau JP, Qianqian L, Balloch S, Calton LJ. Reversed-phase UPLC-MS/MS Analysis of Plasma Catecholamines and Metanephrines for Clinical Research. Waters Corporation; 2020.