Sensitive and Selective Quantitation of N- Nitroso Dabigatran Etexilate Impurity in Dabigatran Etexilate API using the Agilent 6495C LC/TQ

Význam tématu

Kontrola nitrosaminů v léčivých látkách je klíčová vzhledem k jejich mutagenním a potenciálně karcinogenním vlastnostem. Výskyt NDSRI (Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities) v globálních dodavatelských řetězcích vedl k četným stažením léčiv, což zdůrazňuje nutnost citlivého a selektivního sledování těchto nečistot, zejména v API (Active Pharmaceutical Ingredient).

Cíle a přehled studie

Cílem této práce bylo vyvinout a validovat vysoce citlivou a selektivní metodiku pro kvantifikaci N-nitroso dabigatran etexilátu v API dabigatranu etexilátu. Metoda využívá triple kvadrupólový spektrometr Agilent 6495C LC/TQ v režimu Multiple Reaction Monitoring (MRM) spojený s chromatografem 1290 Infinity II LC.

Použitá instrumentace

• Hmotnostní spektrometrie: Agilent 6495C LC/TQ s AJS ESI (pozitivní ionizace).
• Kapalinová chromatografie: Agilent 1290 Infinity II LC s kolonkou Poroshell HPH-C18 (150×3,0 mm, 2,7 µm).
• Mobilní fáze A: voda s 1 mM ammonium trifluoroacetátu a formovou kyselinou; B: směs methanolu a acetonitrilu.
• Gradientní program: 20 min, počáteční podíl A/B 55/45, změny až na 15/85 a návrat.
• MRM přechody: 657,3→364,1; 657,3→433,2; 657,3→627,3 m/z; optimalizované fragmentor, kolizní energie a zdrojové parametry.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu v rozmezí 0,01–1,0 ng/mL (0,002–0,2 ppm vůči API) s korelačním koeficientem R2=0,9993 (1/x2 vážení). Detekční a kvantifikační limity dosáhly hodnot 0,006 ng/mL (S/N>70) a 0,01 ng/mL (S/N>190). Selektivita byla zajištěna optimálním chromatografickým rozlišením impurity od matrice API a správným výběrem kvantifikátorových a kvalifikátorových iontů. Meziopaká precizita měření (n=6) vykázala RSD <5 %. Recovery studia při koncentraci 0,1 ng/mL (0,02 ppm vůči API) ve třech šaržích dosáhly 90–110 %.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá metoda poskytuje robustní nástroj pro pravidelnou kontrolu NDSRI v API, splňuje požadavky regulačních orgánů na citlivost i přesnost a minimalizuje riziko falešné pozitivní či negativní detekce. Umožňuje včasné odhalení nečistot a podporuje kvalitu a bezpečnost finálních farmaceutických produktů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další farmaceutické nitrosaminy v různých maticích.
• Integrace automatizovaných vzorkovačů a on-line přípravy vzorku pro vyšší propustnost.
• Využití vysokorozlišovací MS (HRMS) pro identifikaci neznámých NDSRI.
• Další zlepšení chromatografických fází pro zrychlení analýzy.

Závěr

Byla úspěšně vyvinuta a validována vysoce citlivá a selektivní metoda kvantifikace N-nitroso dabigatran etexilátu v API dabigatranu etexilátu. Metoda kombinuje optimální chromatografické rozlišení, nízké LOQ a vysokou reprodukovatelnost, což ji činí vhodnou pro rutinní kontrolu kvality a dodržování regulačních limitů.

Reference

1. U.S. Food and Drug Administration. Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs). CDER Guidance for Industry, August 2023.
2. Agilent Technologies. Low-Level Quantitation of N-Nitroso Dabigatran Etexilate Impurity in Dabigatran Etexilate Mesylate API Using the Agilent 6495C LC/TQ. Application Note 5994-7066E, 2024.