Analysis of Carcinogenic Nitrosamines at Ultra-trace Levels Among Terbinafine Using LC/TQ

Význam tématu

Analýza genotoxických N-nitrosaminů v léčivých přípravcích je zásadní pro zajištění bezpečnosti pacientů a souladu s regulacemi jako FDA. Tyto sloučeniny ve stopových koncentracích mohou představovat karcinogenní riziko, proto je nutné vyvinout citlivé a spolehlivé metody pro jejich detekci v API a hotových lécích.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem posteru bylo vyvinout a validovat metodiku pro kvantifikaci tří NDSRI (n-nitroso-desmethyl terbinafine – NDT, n-nitroso terbinafine impurity A – NTA, n-nitroso terbinafine degradant – NTD) v terbinafinu při úrovních níže 0,007 ppm (0,25 ng/mL). Studie zkoumá parametry linearity, citlivosti, opakovatelnosti a recovery ve vzorcích API a tablet.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byla použita ultravysoce výkonná kapalinová chromatografie spojená s trojčtvrtečním hmotnostním spektrometrem Agilent 1290 UHPLC a 6495D LC/TQ.

• Mobily fáze: 5 mM octan amonný ve vodě (A) a methanol (B) s gradientem od 2 % B do 90 % B v čase 35 min.
• Kolona: HPH-C18, 3×150 mm, 2,7 µm, 30 °C.
• Injektor: 20 µL, autosampler 10 °C.
• Detekce MS: dynamický MRM, Q1/Q3 „narrow“, capilární a tryskové napětí 2000 V, suchý plyn 250 °C/15 L/min, plášťový plyn 350 °C/9 L/min.
• Diverter ventil: odfiltrování hlavní látky do odpadu v časech 14,2–20 min a 25,5–30 min, UV detekce při 220 nm.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla výjimečné citlivosti s LOQ 0,25 ng/mL (0,007 ppm) pro všechny tři NDSRI. Linearity byla potvrzena v rozsahu 0,125–2 ng/mL s koeficienty korelace r² ≥ 0,997. Opakovatelnost (%RSD) se pohybovala mezi 5–7 % (n=6). Recovery testy pro API i tablety ukázaly hodnoty 96–108 %, čímž byla prokázána robustnost a správnost metody. Díky programovanému gradientu a využití diverter ventilu došlo k účinné separaci nitrosaminů od hlavní molekuly terbinafinu, čímž se minimalizovalo kontaminace a zajišťovala stabilita měření.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje farmaceutickým laboratořím nástroj pro rutinní kontrolu karcinogenních nitrosaminů ve výrobě i finálních formách terbinafinu. Díky vysoké citlivosti a reprodukovatelnosti může sloužit pro QA/QC testování API, surovin i hotových produktů v souladu s přísnými mezinárodními standardy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj metodiky by mohl směřovat k rozšíření spektra sledovaných nitrosaminů i jiných potenciálně nebezpečných nečistot v široké škále farmaceutických přípravků. Integrace vysoce citlivých technik HRMS či online SPE-LC/MS by mohla zkrátit dobu analýzy a zvýšit průchodnost laboratoře.

Závěr

Použitá UHPLC-LC/TQ metoda byla úspěšně validována pro ultra-trace kvantifikaci tří NDSRI v terbinafinu. Dosahuje vynikající citlivosti, linearity a reproducibility, což zajišťuje spolehlivý monitoring genotoxických nitrosaminů ve farmaceutickém průmyslu.

Reference

• Low-Level Quantitation of N-Nitroso Dabigatran Etexilate Impurity in Dabigatran Etexilate Mesylate API Using the Agilent 6495C. Agilent Application Note, 5994-7066EN.
• Nitrosamine Impurities Application Guide. Agilent Application Guide, 5994-2393EN.