Trace-level Estimation of N-Nitroso Isavuconazonium Sulphate in Isavuconazonium Sulphate API Using Nominal Mass LC/MS

Význam tématu

V současném farmaceutickém průmyslu představují nitrosaminy závažné mutagenní nečistoty, které vyžadují sledování na stopové úrovni. Isavuconazonium sulfate je antifungální léčivo, jehož API může obsahovat N-nitroso nečistoty (NDSRI) citlivé na vlhkost a pH. Precizní stanovení těchto nečistot je nezbytné pro zajištění kvality a bezpečnosti léčiva.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout vysoce citlivou a robustní LC/TQ metodu pro kvantifikaci N-nitroso isavuconazonium sulphate v API na úrovni sub-ppb. Studie zkoumala lineární rozsah, limity detekce a kvantifikace, stabilitu analytů v roztoku a robustnost přípravy vzorku.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byl použit chromatograf Agilent 1290 Infinity II spojený s triple quadrupolem Agilent 6495D LC/TQ. Kolona Poroshell HPH-C18 (3,0×150 mm, 2,7 µm) s gradientem 1 mM ammonium trifluoroacetátu (fáze A) a acetonitrilem (fáze B).

• Průtok 0,8 mL/min, injekce 20 µL
• Diluent: methanol/voda (1:1) s 0,1 % kyselinou mravenčí
• MRM přechody: m/z 747,2→164,8 (kvantifikátor), 747,2→121,0 (kvalifikátor)
• ESI zdroj: kapilární napětí 1 600 V, tryskové napětí 1 400 V, teploty 280/325 °C

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LOD 1 ppt a LOQ 5 ppt při koncentraci API 1 mg/mL. Lineární rozsah pokrývá 1–1 000 ppt s R2>0,998. Stabilita standardu i API byla prokázána po dobu tří dnů, RSD plochy 2,2 %. Robustnost přípravy vykázala RSD 2,9–3,5 % na úrovních 10 a 100 ppt. Retenční čas impurity byl oddělen od API o cca 2 minuty, bez interferencí blanků.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivou kontrolu NDSRI v isavuconazonium sulfate API na sub-ppb úrovni. Díky vysoké citlivosti a stabilitě je vhodná pro rutinní QC, zajištění shody s regulačními limity a minimalizaci zdravotního rizika.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření automatizace přípravy vzorků, aplikace pro jiné NDSRI a integrace s vysokorychlostními systémy a vysoko-rozlišovacími spektrometry. Potenciál má také monitoring nečistot přímo v hotových formách léčiv.

Závěr

Vyvinutá LC/TQ metoda pro stanovení N-nitroso isavuconazonium sulphate je vysoce citlivá, přesná a robustní. Prokázala stabilitu, linearitu a dostatečné chromatografické oddělení nečistoty od API, což umožňuje spolehlivou kontrolu kvality.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC
• Agilent 6495D Triple Quadrupole LC/TQ
• Poroshell HPH-C18 kolona (3,0×150 mm, 2,7 µm)
• Ammonium trifluoroacetát, acetonitril, kyselina mravenčí

Reference

• Low-Level Quantitation of N-Nitroso Dabigatran Etexilate Impurity in Dabigatran Etexilate Mesylate API Using the Agilent 6495C Application Note 5994-7066EN
• Highly Sensitive Quantification of Mutagenic NDSRI N-Nitroso Propranolol in Propranolol API and 40 mg Tablets Using LC/MS/MS Application Note 5994-5161EN
• Quantitation of N-Nitroso Sitagliptin Impurity (NTTP) in Sitagliptin and Metformin Combination Drug Product Using the Agilent 6475 LC/TQ Application Note 5994-7161EN
• Nitrosamine Impurities Application Guide 5994-2393EN
• Ultra-Fast Analysis of Nitrosamines Using SPE-QQQ Application Note 5994-3752EN