Low-Level Quantitation of N-Nitroso Dabigatran Etexilate Impurity in Dabigatran Etexilate Mesylate API Using the Agilent 6495C LC/TQ

Význam tématu

Nitrosaminy jsou potenciálně karcinogenní látky, které se mohou v léčivých substancích tvořit z aminů a dusitanů. Jejich detekce a kvantifikace v API na úrovni pg/mL je kritická pro zajištění bezpečnosti pacientů a souladu s regulačními limity.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout vysoce specifickou, citlivou a reprodukovatelnou LC/TQ metodu pro kvantifikaci N-nitroso dabigatran etexilate impurity v dabigatran etexilate mesylate API. Metoda byla optimalizována z hlediska MRM parametrů a provozních podmínek zdroje, aby bylo dosaženo LOQ na úrovni 10 pg/mL.

Použitá metodika

Reverzní fázová chromatografie na koloně Agilent Infinity Lab Poroshell HPH-C18 (150×3,0 mm, 2,7 µm) s mobilní fází A (1 mM ammonium trifluoroacetate + formic acid ve vodě) a B (MeOH:ACN 80:20) v průtoku 0,5 mL/min. Gradientní program do 20 min s diverter ventilem pro přepínání toku do odpadu a do MS. Vzorky připravené v diluentu MeOH:ACN 90:10 s 0,05 % NH4OH, standardy v rozsahu 0,01–1,0 ng/mL, API vzorky připraveny jako 5 mg/mL roztok.

Použitá instrumentace

Agilent 1290 Infinity II LC v tandemu s Agilent 6495C triple quadrupole LC/TQ vybaveným Agilent Jet Stream (AJS) ionizačním zdrojem. Klíčové zdrojové parametry: nozzle voltage 2000 V, capillary voltage 3200 V, gas temperature 250 °C, sheath gas temperature 400 °C, iFunnel RF 150/60 V.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LOD 6 pg/mL (0,0012 ppm) a LOQ 10 pg/mL (0,002 ppm) při S/N >70 a >190, rms. Linearita byla potvrzena v rozsahu 0,01–1,0 ng/mL s R2 = 0,9993 (váha 1/x2). Oddělení N-nitroso dabigatran etexilate od API bylo čisté bez interferencí. Preciznost (RSD) ≤2,65 % a recovery 90–110 % pro tři různé šarže API.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rutinní kontrolu kvality API a screening nitrosaminů v souladu s FDA a ICH požadavky. Vysoká citlivost a selektivita podporují detekci mutagenních kontaminant pod regulačními limity.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace na další NDSRI v různých API, použití HRMS pro neznámé nitrosaminy, automatizace přípravy vzorků a zavedení AI-supportovaných datových workflow pro urychlení analýzy a vyhodnocení.

Závěr

Vyvinutá LC/TQ MRM metoda je robustní, vysoce citlivá a specifická pro kvantifikaci N-nitroso dabigatran etexilate impurity v dabigatran etexilate mesylate API a splňuje požadavky na LOD, LOQ, linearitu, preciznost a recovery pro rutinní QC.

Reference

• 1. Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Recommended Acceptable Intake Limits for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRIs) Guidance for Industry. August 2023.
• 2. Bernardi R., Fröehlich P., Bergold A. Development and Validation of a Stability-Indicating Liquid Chromatography Method for the Determination of Dabigatran Etexilate in Capsules. J. AOAC Int. 2013, 96(1), 37–41.
• 3. FDA Guidance: Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry Method for the Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs.
• 4. FDA Guidance: Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry Method for the Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin Drug Substance and Drug Product.
• 5. Schlingemann J. et al. The Landscape of Potential Small and Drug Substance Related Nitrosamines in Pharmaceuticals. J. Pharm. Sci. 2023, 112(5), 1287–1304.
• 6. Anji Karun Mutha V.V.S.R.N., Katari B.V.N.R. Hydrolytic Degradation Study of Dabigatran Etexilate Mesylate: Isolation and Structural Elucidation of New Degradants. Anal. Chem. Lett. 2018, 8(3), 277–286.