A CLINICAL RESEARCH METHOD FOR THE ANALYSIS OF IMMUNOSUPPRESSANT DRUGS IN WHOLE BLOOD USING CAPITAINER™ B DEVICES

Význam tématu

Analýza imunosupresivních léků je klíčová pro monitorování terapie u transplantovaných pacientů. Tradiční odběry vyžadují větší objem krve a návštěvu laboratoře, což je časově náročné a invazivní. Mikrosampling s Capitainer B usnadňuje odběr malého objemu krve, zvyšuje komfort pacienta a umožňuje vzdálené vzorkování.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo ověřit metodiku pro kvantitativní stanovení cyklosporinu, everolimu, sirolimu a takrolimu z 10 µL DBS (dried blood spot) vzniklého z 30 µL celkové krve pomocí Capitainer B a UPLC–MS/MS, a validovat ji pro klinický výzkum.

Použitá metodika

• Příprava vzorků: nanesení 30 µL krve na Capitainer B, vznik 10 µL DBS, sušení a přenos do mikrozkumavky.
• Extrahce: přidání izotopových vnitřních standardů, míchání, sonikace, acidifikace, extrakce tert-metylbutyl etherem, vysušení.
• Rekonce: mobilní fáze voda/ACN (50:50), injekce do UPLC HSS C18 SB (1,8 µm, 2,1×30 mm), gradient s fluorid-amonným pufrem, doba běhu 1,5 min.

Použitá instrumentace

• Waters ACQUITY UPLC I-Class FL
• Xevo TQ Absolute Mass Spectrometer (ESI+)
• Capitainer B Device
• MassTrak Immunosuppressant Calibrator and Control Sets
• TruView Total Recovery vial

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearity: kalibrační rozsahy 1–30 ng/mL (everolimus, sirolimus, takrolimus) a 25–1500 ng/mL (cyklosporin) s r² >0,99 ve 5 bězích.
• Preciznost: celková variabilita ≤7,6 % CV při třech QC úrovních (2, 8, 22 ng/mL; u cyklosporinu 150, 400, 900 ng/mL).
• Citlivost: detekce 25 ng/mL cyklosporinu a 1 ng/mL ostatních látek.
• Akurátní výsledky: průměrné % bias ≤±6 % oproti ALTM EQA vzorkům.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimalizovaný objem vzorku zvyšuje komfort pacienta a umožňuje remote sampling.
• Zkrácení času a nákladů na odběr i přípravu vzorků.
• Vhodné pro klinické studie a terapeutický monitoring imunosupresiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Decentralizované klinické studie a domácí odběr vzorků pomocí mikrosamplingu.
• Rozšíření spektra monitorovaných farmak pro terapeutický drug monitoring.
• Automatizace extrakčních kroků pro vyšší throughput.

Závěr

Metoda založená na Capitainer B a UPLC–MS/MS splňuje validační kritéria pro klinický výzkum imunosupresiv. Nabízí citlivé, přesné a efektivní řešení s minimálním objemem vzorku a potenciálem pro vzdálené odběry.