LC-MS/MS Analysis of Immunosuppressant Drugs in Whole Blood using the Xevo TQ Absolute with the Capitainer® B Device for Clinical Research

Význam tématu

Imunosupresiva jako cyklosporin, everolimus, sirolimus a takrolimus vyžadují přesné sledování v klinických studiích i v rutinní praxi, aby bylo možné optimalizovat léčbu při minimalizaci toxických účinků. Metoda využívající malý objem krve a sušenou kapku zaručuje méně invazivní odběr a zachování analytické citlivosti.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit rychlou a citlivou LC-MS/MS metodu pro simultánní kvantifikaci čtyř imunosupresiv z malého objemu lidské krve sušené na kapsátech Capitainer B.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika spočívá v:

• Odběru 30 µl plné krve na Capitainer B zařízení pro vytvoření sušené krevní kapky (10 µl).
• Extrakcí kapalina-kapalina s vnitřními standardy, vysušením a rekonstitucí ve směsi mobilních fází.
• Chromatografickém dělení na kolonce ACQUITY UPLC HSS C18 SB pomocí systému ACQUITY UPLC I-Class PLUS (run time 1,5 minuty).
• Detekci v módu MRM na hmotovém spektrometru Xevo TQ Absolute s elektrosprejovou ionizací a pozitivní polaritou.

Klíčová instrumentace:

• Waters ACQUITY UPLC I-Class PLUS
• Waters ACQUITY UPLC HSS C18 SB Column, 1.8 µm, 2.1×30 mm
• Waters Xevo TQ Absolute Triple Quadrupole MS
• Softwarový balík MassLynx v4.2 s TargetLynx

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda byla validována v pěti analytických bězích:

• Citlivost na nejnižších kalibrátorech s poměrem signál/šum >10:1.
• Linearita s r2 ≥0,99 pro všechna imunosupresiva ve stanovených rozsazích.
• Přesnost (celková přesnost a opakovatelnost) ≤7,6 % RSD.
• Bez detekovatelného carry-over mezi vzorky.
• Dobrá shoda vnější kontrolní QA vzorky (LGC ALTM).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé (<2,2 min inj-inj) a přesné sledování imunosupresiv při minimálním objemu krve, což je výhodné pro klinický výzkum, rodinné studie či domácí odběry s méně invazivními postupy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření na bodové odběry krve mimo klinická pracoviště, automatizace přípravy vzorků, adaptace na další terapie a kombinaci s on-line kvalifikovanými kontrolami kvality pro personalizovanou medicínu.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda s použitím sušené krevní kapky z Capitainer B zařízení prokázala vysokou citlivost, přesnost i linearitu pro čtyři klíčová imunosupresiva a splňuje požadavky klinického výzkumu na rychlost a spolehlivost.

Reference

• Deprez S., Van Uytfanghe K., Stove C.P. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for therapeutic drug monitoring of immunosuppressants and creatinine from a single dried blood spot using the Capitainer qDBS device. Analytica Chimica Acta, 1242 (2023): 340797.