ACQUITY™ UPLC™ I-Class/Xevo™ TQ Absolute IVD System: Analytical Performance for Immunosuppressive Agents using a Microsampling Device

Význam tématu

Monitorování hladin imunosupresivních léků v krvi je nezbytné pro optimalizaci terapie pacientů po transplantacích. Využití mikrosamplingových metod přináší výhody v podobě menšího objemu vzorku, snadnějšího sběru a skladování. Kombinace UPLC a tandemové hmotnostní spektrometrie zajišťuje vysokou citlivost a selektivitu analýzy.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo otestovat analytické parametry systému ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ Absolute IVD pro stanovení cyklosporinu, everolimusu, sirolimu a takrolimu ve vzorcích úplné krve získaných pomocí mikrosamplingového zařízení Capitainer B.

Použitá metodika a instrumentace

• Instrumentace: ACQUITY UPLC I-Class spojený s hmotnostním spektrometrem Xevo TQ Absolute IVD.
• Řízení a zpracování dat: MassLynx IVD v4.2 a TargetLynx Application Manager.
• Příprava vzorku: 30 μl krve zaschnutých na zařízení Capitainer B (10 μl DBS), extrakce vodou/methanolem a kyselinou chlorovodíkovou/tert-butyl methyl etherem.
• Chromatografie: kolona HSS C18 SB 1.8 μm (2.1×30 mm), mobilní fáze A – 0.05 mM fluorid amonný ve vodě, B – 0.05 mM fluorid amonný v methanolu, průtok 0.8 ml/min, gradient 50–100 % B.
• MS/MS: ESI v kladné polaritě, režim MRM, rozlišení MS1 a MS2 0.75 FWHM.

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární rozsah kalibrace pro všechny analyty se shodou r2 > 0.995.
• Mez detekce (LLOQ) stanovena při poměru signál/šum > 10 pro jednotlivé analyty.
• Celková přesnost (CV) QC vzorků byla < 10 % u všech látek (n=20–25).
• Průměrný bias vůči LC-MS ALTM standardu se pohyboval v akceptovatelném rozmezí ±15 %.
• Chromatogramy demonstrují dobrou separaci a citlivost na koncentracích 1–25 ng/ml.

Přínosy a praktické využití metody

• Možnost přesného a rychlého kvantitativního stanovení imunosupresiv.
• Malý objem krve vhodný pro pediatrické a ambulantní odběry.
• Robustní a reprodukovatelné výsledky v režimu in vitro diagnostiky.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozšíření mikrosamplingových přístupů pro terapeutický monitoring vzdáleně sbíraných vzorků.
• Automatizace přípravy DBS vzorků a integrace s elektronickými zdravotními záznamy.
• Rozvoj multikapalinových metod pro paralelní stanovení širšího spektra imunosupresiv.

Závěr

Testovaná sestava UPLC-MS/MS prokázala vysokou citlivost, přesnost a reprodukovatelnost při stanovení cyklosporinu, everolimu, sirolimu a takrolimu z mikrosamplingových vzorků úplné krve. Výsledky podporují použití systému v klinických laboratořích pro přesný terapeutický monitoring.

Reference

• Waters Corporation. ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ Absolute IVD System Application Note, 720007888, March 2023.