Confidence in Your Calibrators: MassTrak™ Immunosuppressant Calibrator and Quality Control Sets for the LC-MS/MS Analysis of Cyclosporine, Everolimus, Sirolimus, and Tacrolimus

Význam tématu

Imunpotlačující léky jako cyklosporin, everolimus, sirolimus a takrolimus jsou klíčové pro léčbu transplantovaných pacientů. Jejich přesná kvantifikace v krvi je nepostradatelná pro optimalizaci dávek a prevenci toxicity či graft rejection. Tradiční imunoanalytické metody často vykazují omezenou selektivitu a variabilní přesnost při nízkých koncentracích, což vede k rostoucímu využití LC-MS/MS pro spolehlivější výsledky.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo ověřit výkonnost sady MassTrak Immunosuppressant Calibrator a Quality Control Sets (IVD) od společnosti Waters pro kvantifikaci čtyř imunpotlačujících sloučenin v lidské krvi pomocí validované LC-MS/MS metody. Studie demonstruje linearitu, citlivost, přesnost, opakovatelnost a shodu s externími kontrolními vzorky (EQA UK NEQAS).

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci a detekci byl použit systém ACQUITY UPLC I-Class FL spojený s hmotovým spektrometrem Xevo TQ-S micro Triple Quadrupole. Instrumentace:

• Chromatograf: ACQUITY UPLC I-Class FL
• Kolona: ACQUITY UPLC HSS C18 SB, 1,8 µm, 2,1 × 30 mm
• Teplota kolony: 55 °C, vzorku: 8 °C
• Mobile fáze A: voda + 2 mM acetát amonný + 0,1 % kyseliny mravenčí
• Mobile fáze B: methanol + 2 mM acetát amonný + 0,1 % kyseliny mravenčí
• Ionizace: ESI pozitivní režim, kapilární napětí 0,8 kV

Vzorek (50 µL) byl připraven srážením bílkovin 0,1 M roztokem síranu zinečnatého a interním standardem, poté centrifugován. Následovala injekce 20 µL do UPLC-MS/MS. Metoda využívá multiple reaction monitoring (MRM) pro selektivní kvantifikaci.

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity: kalibrační křivky vykázaly koeficient determinace r2 ≥ 0,9988 pro všechny čtyři analyty.
S/N: poměr signálu k šumu v nejnižší kalibrační úrovni (C1) byl ≥ 10.
Precision & repeatability: celková přesnost a opakovatelnost (n=25) pro tři QC úrovně byla ≤ 7,1 % CV.
Accuracy: průměrná správnost QC se pohybovala mezi 94,5–103,6 %.
Shoda s EQA: Altman-Bland analýza pro vzorky UK NEQAS ukázala průměrné metodové odchylky v rozmezí ± 7,4 %, což potvrzuje metrologickou stopu a shodu s referenčními hodnotami.

Přínosy a praktické využití metody

• Lyofilizované kalibrátory a QC materiály zkracují čas přípravy vzorků.
• Vysoká selektivita a citlivost LC-MS/MS eliminuje zkreslení způsobené křížovou reaktivitou.
• Shoda s ISO 17511 podporuje harmonizaci výsledků mezi laboratořemi.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření LC-MS/MS metodiky v klinických laboratořích díky automatizaci přípravy vzorků, multiplexní analýze více imunosupresivních i dalších terapeutických látek v jediném běhu, integraci do laboratorních informačních systémů a rozvoji standardizovaných kalibrátorů pro lepší mezinárodní porovnatelnost.

Závěr

Studie prokázala, že sada MassTrak Immunosuppressant Calibrator a QC Sets poskytuje vysokou spolehlivost a přesnost pro analýzu cyklosporinu, everolimu, sirolimu a takrolimu v lidské krvi. Metoda dosahuje výborné linearity, citlivosti, reproducibility ≤ 7,1 % CV a shody s externími kontrolními vzorky, což ji činí vhodnou pro klinické a výzkumné aplikace.