Fast and reliable method for the analysis of testosterone, androstenedione, and 17-hydroxy progesterone from human plasma

Význam tématu

Stanovení steroidních hormonů testosteronu, androstenedionu a 17-hydroxyprogesteronu je klíčové pro diagnostiku endokrinních poruch a sledování terapeutických zásahů. Vysoké endogenní hladiny a variabilita vzorků vyžadují citlivé, rychlé a reprodukovatelné analytické metody s minimalizací matricových vlivů.

Cíle a přehled studie / článku

Studie představuje vysoce průchodnou metodu spojující mikroškalovou extrakci na pevné fázi (SPE) se systémem LC-MS/MS pro kvantifikaci tří steroidů v lidské plazmě. Cílem bylo dosáhnout vysoké přesnosti, preciznosti a rychlosti analýzy vhodné pro rutinní klinické i výzkumné aplikace.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnuje následující kroky:

• Prekultivaci a extrakci vzorku pomocí SOLAμ HRP 96well SPE destičky: kondice s 0,1 % kyselinou mravenčí, podmínka s methanolem a vodou, eluční objem 2×25 μl methanolu.
• Chromatografii: Dionex UltiMate 3000 RSLC, analytická kolona Syncronis C18 1,7 μm 100×2,1 mm, ochranná kolona Hypersil GOLD 5 μm, gradient s mobilní fází A (0,1 % kyselina mravenčí ve vodě) a B (acetonitril), průtok 0,3 ml/min, kolona vyhřátá na 45 °C.
• Detekci: Thermo Scientific TSQ Quantiva třetí kvadrupólové MS, zdroj APCI v pozitivním režimu, čas skenu 0,02 s, tranzice m/z podle jednotlivých sloučenin.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• Lineární rozsah 0,5 až 500 ng/ml se regresními koeficienty R2 ≥ 0,99.
• Bias od nominálních hodnot v rozmezí –12,4 až +14,7 % v PBS a –2,5 až +4,4 % ve vzorcích plazmy.
• Relativní standardní odchylky (RSD) QC vzorků ≤ 10,6 % při koncentracích 1,5 a 400 ng/ml.
• Obnova analytů 92–106 % a nízké matricové efekty (–12,8 až +8,3 %).
• Kompletní chromatografická separace všech komponent do 4 minut.

Přínosy a praktické využití metody

Díky mikroškalové SPE se spotřebuje minimální objem plazmy, metoda poskytuje vysokou reprodukovatelnost, citlivost a propustnost vzorků. Robustní SPE formát a rychlá LC-MS/MS analýza usnadňují integraci do rutinní klinické diagnostiky i průmyslového QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování zahrnuje:

• Automatizaci přípravy vzorků s online SPE integrací.
• Rozšíření panelu analyzovaných steroidů a jejich metabolitů.
• Využití vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro detailní charakterizaci strukturálních izomerů.
• Další miniaturizaci a zvýšení throughput pro velké kohortové studie.

Závěr

Popsaná metoda kombinuje rychlou mikroškalovou extrakci se citlivou a selektivní LC-MS/MS analýzou steroidů v lidské plazmě. Výsledky ukazují vynikající přesnost, precizi, vysokou obnovu a nízké matricové efekty, což činí metodu vhodnou pro široké spektrum klinických a výzkumných aplikací.

Reference

• Bardsley J. Fast and reliable method for the analysis of testosterone, androstenedione and 17-hydroxy progesterone from human plasma. Thermo Fisher Scientific Application Note No 21173, 2020