Robust Extraction, Separation and Quantitation of Structural Isomer Steroids From Human Plasma by SPE with LC-MS/MS Detection

Význam tématu

Měření steroidů v lidské plazmě je klíčové pro klinický výzkum a diagnostiku. Přesná kvantifikace a schopnost rozlišit strukturální isomery zajišťují spolehlivá data pro hodnocení hormonálních stavů, léčebných účinků a metabolických studií.

Cíle a přehled studie / článku

• Vyvinout metodiku pro extrakci a kvantifikaci 12 steroidů z plazmy
• Implementovat SPE pro odstranění matrixových interferencí
• Optimalizovat LC-MS/MS separaci strukturálních isomerů pomocí aketonitrilového a methanolového gradientu

Použitá metodika

Vzorky plazmy a PBS byly ošetřeny sulfátem zinečnatým, centrifugovány a čištěny na SOLAµ HRP SPE destičce. Eluce proběhla v acetonitril–methanolové směsi, výtah následně ředěn mobilní fází A.
Metoda 1 využívá gradient z aketonitrilu pro rychlou separaci dvanácti běžných steroidů během 4,2 minuty. Metoda 2 používá metanolový gradient (12 minut) v přítomnosti amonného fluoridu pro lepší rozlišení izobarických sloučenin.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific Vanquish Horizon UHPLC
• Accucore biphenyl analytická kolona 2,6 µm
• Thermo Scientific TSQ Quantiva Triple-Stage Quadrupole MS
• Chromeleon 7.2.8 pro akvizici a zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

• Biphenylová kolona vykázala vyšší peak capacity (165 vs. 146) a užší šířky píků oproti C18.
• Stabilita retence s RSD < 0,1 % pro 25 opakování.
• Rozlišení izomerů 21-deoxycortisol/11-deoxycortisol se zvýšilo z 1,9 na 7,93 na biphenylu.
• Soubory klinicky významných izomerů (cortisone/aldosterone, 17α-hydroxyprogesterone/11-deoxycorticosterone) byly zřetelně separovány.
• Metoda prokázala přesnost 95–107 % a preciznost < 8 % v rozsahu 50–50000 pg/mL.

Přínosy a praktické využití metody

• Spolehlivá separace strukturálních izomerů usnadňuje klinickou diagnostiku.
• Rychlá analýza s vysokou propustností vzorků.
• Široký dynamický rozsah kvantifikace podporuje různé koncentrace steroidů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření analýzy na další steroidní profily a metabolity.
• Integrace plně automatizovaných pracovních postupů.
• Využití v personalizované medicíně, toxikologii a dopingu.

Závěr

Accucore biphenyl kolona kombinuje hydrofobní, aromatickou a polární selektivitu pro výrazné zlepšení rozlišení steroidních izomerů. Kombinace SPE a UHPLC-MS/MS zajišťuje přesnou a precizní kvantifikaci v klinickém prostředí.

Reference

• Domenger T, Bardsley J, Woodmansey K, Tremintin S. Robust Extraction, Separation and Quantitation of Structural Isomer Steroids From Human Plasma by SPE with LC-MS/MS Detection. Thermo Fisher Scientific Application Note, 2018.