LC-MS/MS Method for Detection and Quantitation of Azido Impurities in Irbesartan Drug Substan

Význam tématu

Analýza azidových nečistot v léčivu irbesartan je klíčová z hlediska bezpečnosti a souladu s regulacemi. Mutagenní vedlejší produkty s tetrazolovou skupinou musí být detekovány v ultra nízkých koncentracích, aby se minimalizovalo riziko pro pacienta a vyhovělo pokynům mezinárodních úřadů.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout a validovat vysoce citlivou LC-MS/MS metodu pro simultánní stanovení čtyř azidových nečistot (AZBT, AZBC, AMBBT, AMBBC) v surovém API irbesartanu. Studie hodnotila linearitu, limity detekce a kvantifikace, přesnost a spolehlivost výsledků.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky irbesartanu se připravovaly jednoduchým ředěním v 80% acetonitrilu následovaným vortexováním a centrifugací (4000 rpm, 10 min). Supernatant se injektoval do chromatografu.

Separační podmínky:

• Chladič Nexera X3 se sloupcem Shim-pack GIST C18 (3,0 × 100 mm, 3 µm)
• Mobilní fáze A: 0,1% kyselina mravenčí ve vodě; B: 0,1% kyselina mravenčí v acetonitrilu (gradient 35→100→35 % B)
• Průtok 0,4 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 5 µL
• Odklápěcí ventil: odpad 0–7,6 min, MS 7,6–18 min

Detekce hmotnostní spektrometrií:

• Systém LCMS-8050, ESI pozitivní režim
• Rozhraní 300 °C, DL 250 °C, heat block 400 °C
• Nosný plyn dusík (nebulizace 3,0 L/min, sušení 10 L/min), topný plyn čistý vzduch 10 L/min
• MRM přechody pro každou nečistotu dle předvolených prekurzorových a produktových iontů

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatografické rozlišení API a všech čtyř nečistot bylo vyhovující. Kalibrační křivky ve směsi 0,5–50 ng/mL vykázaly koeficienty determinace r2 ≥ 0,99. Limity detekce LOD se pohybovaly mezi 0,01 a 0,2 ng/mL, LOQ mezi 0,03 a 0,5 ng/mL. Spike-and-recovery testy (1, 20, 40 µg/g) prokázaly obnovitelnost 95–111 %, což potvrzuje přesnost a přesnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda umožňuje rutiní kontrolu genotoxických nečistot v irbesartanu při velmi nízkých koncentracích. Díky vysoké citlivosti a robustnosti může být implementována v kontrolních laboratořích, výrobních provozech i při validaci dodavatelských šarží.

Budoucí trendy a možnosti využití

Potenciál metody spočívá v rozšíření na další sartany a strukturově příbuzné API. Další vývoj může zahrnovat automatizaci přípravy vzorků, nasazení vysoce rozlišených hmotnostních analyzátorů pro neznámé nečistoty a integraci do LIMS systémů pro vyšší průchodnost laboratoří.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na přístrojích Nexera X3 a LCMS-8050 prokázala vynikající analytické parametry a splňuje požadavky regulatorních úřadů na stanovení azidových nečistot v irbesartanu. Metoda je vhodná pro rutina a vývoj nových farmaceutických produktů.

Reference

• MFDS Method (2021), MFDS, Korea
• Genotoxic substances in sartans, OMCL Swissmedic (2021)