Highly Sensitive LC/MS/MS Method for the Simultaneous Quantification of Mutagenic Azido Impurity Analogues in Five Different Sartan APIs and Formulations

Význam tématu

Genotoxické azido nečistoty vznikají při syntéze sartanské API s tetrazolovým jádrem a mohou ohrozit bezpečnost pacientů. Regulátoři (ICH M7, US-FDA, EMA, MHRA, Health Canada, TGA) vyžadují citlivou a selektivní kontrolu těchto nečistot pod úrovní ppm. Rozvoj spolehlivé LC/MS/MS metody proto zásadně přispívá k prevenci kontaminace a zajištění vysoké kvality farmaceutických produktů.

Cíle a přehled studie / článku

Popisuje se vysoce citlivá a rychlá kvantifikace dvou mutagenních azido nečistot AZBT a AZBC v pěti sartanových APIs (Losartan, Valsartan, Irbesartan, Candesartan, Olmesartan) a jejich formulacích. Studie zahrnuje dvě varianty přípravy vzorku a ověření klíčových analytických parametrů (LOQ, LOD, linearita, přesnost, opakovatelnost, recovery).

Použitá metodika a instrumentace

Metoda založená na UHPLC s Agilent 1290 Infinity II a Agilent 6470 triple kvadrupólem v režimu MRM s AJS ionizací. Chromatografické podmínky:

• Kolona InfinityLab Poroshell 120 PFP, 3×100 mm, 2.7 µm, 40 °C
• Mobilní fáze A: 0.1 % HCOOH ve vodě, B: 0.1 % HCOOH v acetonitrilu/vodě (95/5)
• Gradient: 60 % A po 0.1 min, na 100 % B do 12 min, návrat do 60 % A do 18 min, průtok 0.4 mL/min
• Injektované množství: 5 µL, teplota ostřikovače 15 °C

MS podmínky:

• Positive ESI, gas temp. 300 °C, gas flow 6 L/min, sheath gas 300 °C, 10 L/min
• MRM přechody AZBT: 278.2→235.1 (quantifier), 278.2→207.1 (qualifier); AZBC: 207.0→179.1, 207.0→151.0
• Diverter ventil pro odklon vysokokoncentrovaných API do odpadu

Příprava vzorků:

• Metoda 1 – API 2.5 mg/mL, extrakce sonikací, filtrace 0.22 µm
• Metoda 2 – API 0.3 mg/mL, určená pro AZBT

Hlavní výsledky a diskuse

Obě metody prokázaly:

• LOQ 0.2 ppm pro AZBT, 1.0 ppm pro AZBC; LOD 0.05–0.25 ppm
• Lineární rozsahy 0.04–20 ppm (AZBT) a 0.4–20 ppm (AZBC), R2 > 0.995
• Recovery 88–115 % pro AZBT a 80–108 % pro AZBC ve vzorcích API i formulací
• RSD opakovatelnosti < 7.6 % na LOQ a < 5 % při 4 ppm

MRM chromatogramy prokázaly dobrou separaci nečistot od API, diverter ventil účinně chránil MS před přetížením vysokou koncentrací substrátu.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená LC/MS/MS metoda umožňuje:

• Simultánní kvantifikaci dvou azido nečistot v řadě sartanské API a hotových formulacích
• Dosahování velmi nízkých detekčních i kvantifikačních mezí pod regulační požadavky
• Rychlé vyhodnocení kvality surovin i hotových produktů s vysokou opakovatelností

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry vývoje:

• Rozšíření na další genotoxické nečistoty použitím vysokorychlostních UHPLC kolonek a orbitrap/TOF detektorů
• Automatizace přípravy vzorků, miniaturizace a online dodatečné čistění pro rychlejší throughput
• Implementace green chemistry přístupů (vodné eluenty, snížení organických rozpouštědel)

Závěr

Vyvinutá metoda s použitím Agilent 6470 LC/TQ nabízí spolehlivou, citlivou a selektivní analýzu azido nečistot v sartanech, splňuje regulatorní limity a je vhodná pro rutinní kontrolu kvality v průmyslových a kontrolních laboratořích.

Reference

1. ICH M7 Guideline
2. Health Canada Recall Alert
3. TGA Azide Impurity Alert
4. MHRA Sartan Recall
5. EDQM Risk Assessment
6. Swissmedic Safety Communication
7. EDQM Official Methods
8. EDQM Method Parameters AZBT
9. FDA Azide Test Method