Separation of Trypsin Digested Monoclonal Antibody

Význam tématu

Peptidová mapování monoklonálních protilátek je klíčovým nástrojem pro charakterizaci struktury a modifikací biotechnologických léčiv. Přesná separace peptidů po trypsinové digestaci a následná LC-MS analýza umožňují ověřit primární strukturu, identifikovat posttranslační modifikace a sledovat konzistenci výroby.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo demonstrovat vhodnost kolony Shim-pack GISS C18 ve spojení s platformou Nexera X2 a detektorem LCMS-9030 pro detailní peptidové mapování NIST referenční monoklonální protilátky (mAb RM 8671). Studie sledovala účinnost separace, sekvenční pokrytí a opakovatelnost měření.

Použitá metodika

Reverzní fázová chromatografie byla provozována v následujících podmínkách:

• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě
• Mobilní fáze B: 0,1 % kyselina mravenčí v acetonitrilu
• Gradient: 1 % B → 60 % B během 112 minut → 95 % B (112–117 min) → návrat na 1 % B (117–120 min)
• Průtok: 0,2 mL/min, teplota kolony 50 °C, objem injekce 1 µL

Použitá instrumentace

• Ultrarychlá kapalinová chromatografie Nexera X2
• Kolona Shim-pack GISS C18 (150 × 2,1 mm, 1,9 µm)
• Hmotnostní spektrometr LCMS-9030 s ohřevem ionizačního rozhraní (Heated ESI+) a rozsahem skenu m/z 350–2000

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza ukázala vysoce rozlišenou separaci peptidů pokrývajících většinu aminokyselinové sekvence protilátky. Sledované peptidy se elutovaly rovnoměrně v průběhu gradientu, s ostrými a symetrickými píky. Opakovatelné retenční časy a nízký stupeň carry-over potvrzují stabilitu metody. Sekvenční pokrytí překročilo 95 %, což umožňuje detailní sledování modifikací.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí robustní nástroj pro QA/QC v biotechnologickém průmyslu, zejména pro:

• ověření identity a integrity mAb
• sledování posttranslačních modifikací
• porovnání mezi výrobními šaržemi

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další zrychlení metodiky prostřednictvím krátkých gradientů a mikro/nano-LC, využití vyšších rozlišení MS a integrace umělé inteligence pro automatizovanou analýzu dat. Rozvoj cílených metod pro kvantifikaci kritických modifikací přinese hlubší vhled do stability a efektivity bioléčiv.

Závěr

Shim-pack GISS C18 v kombinaci s Nexera X2 a LCMS-9030 vytváří spolehlivou a opakovatelnou platformu pro peptidové mapování monoklonálních protilátek, umožňující detailní charakterizaci sekvence a modifikací.