Highly Sensitive Quantification of Mutagenic NDSRI N-Nitroso Propranolol in Propranolol API and 40 mg Tablets Using LC/MS/MS

Význam tématu

Kontaminace léčiv mutagenními nitrozaminy představuje významné riziko pro pacienty a vede k zpětným stažením léčiv i přísným regulacím podle ICH M7 a požadavkům úřadů FDA, EMA či Health Canada. Nitrosaminy příbuzné léčivé látce (NDSRI) mohou vznikat během výroby či skladování, proto je nezbytné vyvinout vysoce citlivé a selektivní analytické metody pro jejich detekci.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této studie bylo navrhnout a validovat LC/MS/MS metodu pro kvantifikaci N-Nitroso Propranololu ve vzorcích API a tabletách propranololu (40 mg) s dosažením LOQ 25 pg/mL (0,005 ppm). Metoda využívá Agilent 6470 LC/TQ a reaguje na požadavky regulatorních limitů pro genotoxické nečistoty.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky API i tablet byly připraveny extrakcí v metanolovém diluentu s vortexem, sonikací a filtrací. Kvantifikace probíhala v režimu MRM:

• Systém UHPLC Agilent 1290 Infinity II s kolonkou Pursuit Diphenyl XRS (3,0×150 mm, 2,7 µm)
• Mobilní fáze A: 5 mM amonný acetát, B: 0,1 % kyselina mravenčí v methanolu; gradient 10–90 % B při 0,4 mL/min při 40 °C
• Injektor při 5 °C, objem vzorku 10 µL, diverter valve k odklonu API do odpadu
• Mass spectrometrie Agilent 6470 Triple Quadrupole s AJS ESI v pozitivním módu, MRM tranzice 289.1→259.2 m/z pro kvantifikátor i kvalifikátor

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla:

• LOD 7,5 pg/mL (0,0015 ppm), LOQ 25 pg/mL (0,005 ppm) se S/N >100
• Lineární rozsah 0,025–10 ng/mL (R² >0,995)
• Reprodukovatelnost RSD <5 % pro bracketing standardy i LOQ úroveň
• Recovery ~100 % v API i tabletách
• Vysoká specifika oddělení od Propranolol N-formyl nečistoty

Přínosy a praktické využití metody

Validated metoda splňuje regulatorní požadavky pro kontrolu genotoxických nitrosaminů v API i finálních formách. Umožňuje rutinní QA/QC monitorování i rychlé nasazení v průmyslových laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření protokolů na další NDSRI v různých léčivých látkách, integrace vysokorychlostních HRMS měření pro screening a automatizace přípravy vzorků v inline aplikacích.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda s Agilent 6470 LC/TQ pro N-Nitroso Propranolol v propranololových API a tabletách prokázala vysokou citlivost, přesnost a robustnost. Metoda je plně validovaná a vhodná pro každodenní rutinní kontrolu mutagenních nečistot.

Reference

1. ICH Harmonised Guideline M7(R1): Assessment and Control of DNA Reactive (Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals. database.ich.org/sites/default/files/M7_R1_Guideline.pdf
2. US FDA. FDA Updates and Press Announcements: Angiotensin II Receptor Blocker (ARB) Recalls: Valsartan, Losartan. https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and-availability/fda-updates-and-press-announcements-angiotensin-ii-receptor-blocker-arb-recalls-valsartan-losartan
3. US FDA. FDA Updates and Press Announcements: NDMA in Metformin. https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and-availability/fda-updates-and-press-announcements-ndma-metformin
4. US FDA. FDA Updates and Press Announcements: NDMA in Ranitidine. https://www.fda.gov/media/141720/download
5. EDQM. N-nitrosamine contamination in Brief. https://www.edqm.eu/en/n-nitrosamine-contamination-in-brief
6. US FDA. FDA Updates and Press Announcements: Nitrosamine in Varenicline (Chantix). https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and-availability/fda-updates-and-press-announcements-nitrosamine-varenicline-chantix
7. Government of Canada. Pfizer recalls Inderal (propranolol hydrochloride) capsules due to nitrosamine impurity. https://recalls-rappels.canada.ca/en/alert-recall/pfizer-recalls-inderal-propranolol-hydrochloride-capsules-due-nitrosamine-impurity