Quantitation of N-Nitroso N-Desmethyl Diphenhydramine in Diphenhydramine HCl API

Význam tématu

Detekce a kvantifikace N-nitroso N-desmethyl diphenhydraminu jako potenciálně škodlivé kontaminace v diphenhydraminium hydrochloridu (API) je zásadní pro splnění regulačních limitů a zajištění kvality farmaceutických přípravků.

• Riziko vzniku NDSRI během syntézy aminu
• Regulační požadavky na maximální denní příjem 26.5 ng
• Nutnost citlivých a selektivních analytických metod

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout vysoce specifickou, citlivou a reprodukovatelnou LC/TQ metodu pro kvantifikaci N-nitroso N-desmethyl diphenhydraminu v diphenhydraminium hydrochloridu pomocí Agilent 1290 Infinity II LC a 6475A triple kvadrupolového hmotového spektrometru.

Použitá metodika a instrumentace

Využitá chromatografie: Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18 kolona (4.6×150 mm, 2.7 μm) s gradientem methanolu a 1 mM ammonium trifluoroacetátu s formiovou kyselinou.
Detekce: dynamické MRM přechody 271.3→167.0 (kvantifikátor) a 271.3→152.0 (kvalifikátor) v pozitivním ionizačním režimu.

• LC moduly: vysokotlaké čerpadlo, multisampler, multicolumn termostat, diode array detektor
• MS zdroj: Agilent Jet Stream, plynné parametry optimalizované pro maximální citlivost
• tMRM: spouštěný MRM pro potvrzení produktových iontů

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II LC
• Agilent 6475A triple kvadrupolový LC/MS systém
• Integrovaný diverter ventil pro přesměrování silně koncentrovaného API

Hlavní výsledky a diskuse

LOD 0.05 ng/mL a LOQ 0.1 ng/mL (odpovídá 0.01 ppm a 0.02 ppm vůči 5 mg/mL API) s poměrem signál/šum nad 25:1 pro LOD a 45:1 pro LOQ.
Linearita v rozsahu 0.05–10 ng/mL s regresním koeficientem nad 0.999 (1/x2 vážení).
Chromatografická separace >7 minut mezi API a impuritou pro vyloučení interferencí.
Opakovatelnost LOQ úrovně s RSD 6.6% (n=7) a přesnost spike recovery 102.5 %.
Ověřená minimální kontaminace carry-over <5 % LOQ.

Přínosy a praktické využití metody

• Efektivní kontrola NDSRI v kvalitativních a kvantitativních analýzách API
• Splnění regulačních požadavků na nitrosaminové impurity
• Vysoká průchodnost a reprodukovatelnost QC procesů

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření využití tMRM pro spolehlivou identifikaci dalších nízkomolekulárních genotoxických impurit
• Aplikace mixed-mode akvizice pro simultánní kvantifikaci a kvalifikaci
• Automatizace a digitalizace analytických procesů pro vysokokapacitní kontrolu

Závěr

Vyvinutá LC/TQ MRM metoda na Agilent 6475A umožňuje spolehlivou a citlivou detekci N-nitroso N-desmethyl diphenhydraminu v diphenhydraminium hydrochloridu. Metoda splňuje požadavky na LOD, LOQ, linearitu, přesnost a opakovatelnost nutné pro rutinní kontrolu kvality farmaceutického API.

Reference

1. Srinivas Chidella et al Highly Sensitive Quantification of Mutagenic NDSRI N-Nitroso Propranolol in Propranolol API and 40 mg Tablets Using LC/MS/MS Agilent Technologies Application Note 5994-5161EN 2022
2. Mastovska K Zulkoski J Zweigenbaum J Triggered MRM LC/MS/MS Method Development Practical Considerations for MRM Optimization Using Agilent MassHunter Data Acquisition Software Agilent Technologies Technical Overview 5991-7195EN 2017
3. Sosienski T Covert K Trace Level Quantification of Potential Mutagenic Impurities in Pharmaceuticals Agilent Technologies Application Note 5994-1238EN 2019
4. Joseph P Banerjee S Vyas S Determination of Genotoxic Nitrosamine Impurity in Bumetanide API and Tablets Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS Agilent Technologies Application Note 5994-2967EN 2020