Simultaneous Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin Extended-Release Tablets Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Stanovení nitrosaminů v metforminu je klíčové z důvodu jejich prokázané genotoxické a pravděpodobně karcinogenní povahy. Regulátoři (FDA, EMA, EDQM, HSA) nařídili stažení řady léčiv včetně metforminu kvůli přítomnosti NDMA. Vysoce citlivé a selektivní metody LC/MS/MS jsou nezbytné pro monitorování stopových úrovní těchto nebezpečných nečistot v lékových formách.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout a validovat dvě varianty LC/MS/MS metod založených na Agilent 6470 Triple Quadrupole pro simultánní stanovení osmi nitrosaminů v metforminu (substance i tablety s prodlouženým uvolňováním). Metoda 1 byla optimalizována pro metforminovou substanci a dobře rozpustné přípravky, zatímco Metoda 2 řeší vzorky, které tvoří suspenzi v methanolu.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrachromatografické podmínky:

• Agilent 1290 Infinity II pumpa, multisampler (10 °C), multicolumn termostat
• Sloupce: Poroshell HPH-C18 4,6×150 mm, 2,7 μm (Metoda 1) a Poroshell 120 PFP 3,0×150 mm, 2,7 μm (Metoda 2)
• Gradientní eluce s 0,1 % kyselinou mravenčí ve vodě (A) a v methanolu (B), průtok 0,5 mL/min, teplota 40 °C

MS/MS podmínky:

• Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS s APCI v pozitivním módu, MRM
• Teplota suchého plynu 300 °C, proud 7 L/min, tlak nebulizéru 25 psi, APCI heater 350 °C, napětí 4 000 V
• Dvojí závěrečné ionty a optimalizované kolizní energie pro každou nitrosaminovou nečistotu

Vzorkování a příprava:

• Metforminová substance: 500 mg rozpuštěné v 5 mL methanolu, filtrace PVDF 0,22 µm
• Tablety XR: drť tablet odpovídající 100 mg API extrahovaná methanolem (Metoda 1) nebo methanolem/wodou (Metoda 2), sonikace, odstředění, filtrace

Analýza dat pomocí softwaru Agilent MassHunter Acquisition a Quantitative Analysis, vážené kalibrační křivky 1/x.

Hlavní výsledky a diskuse

Obě metody prokázaly výjimečnou linearitu (R²>0,995) v širokém rozsahu koncentrací (0,05–50 ng/mL). LODs se pohybovaly od 0,025 ng/mL (Metoda 1) do 0,05 ng/mL (Metoda 2) u NDMA, LOQ kolem 0,1–0,5 ng/mL. Reprodukovatelnost MRM signálů (RSD <5 %) byla potvrzena osmi replikáty i při nízkých úrovních (0,5 ng/mL a 1 ng/mL). Obě metody vykazují recovery 93–116 % při různých municích (0,01–0,05 ppm) v metforminu XR.

Přínosy a praktické využití metody

Metody umožňují spolehlivý screening a kvantifikaci osmi regulovaných nitrosaminů v API i hotových formách metforminu. Díky vysoké citlivosti a selektivitě jsou vhodné pro kontrolu kvality (QC), validaci stabilitních studií a podporu regulačních podání.

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj bude směřovat k dalšímu zvýšení přenositelnosti metod do dalších matric a lékových forem, využití vysokorozlišovací MS pro nečekané nitrosaminy, automatizaci vzorkovacího provozu a rozšíření panelu testovaných nečistot.

Závěr

Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS s optimalizovanou přípravou vzorků a chromatografií umožňuje robustní, citlivé a reprodukovatelné stanovení osmi nitrosaminových nečistot v metforminu za úrovně vyhovující nejpřísnějším regulatorním limitům. Implementace těchto metod v analytické praxi významně přispívá k zajištění bezpečnosti a kvality léčiv.

Reference

1. U.S. Food and Drug Administration. FDA updates and press announcements: angiotensin II receptor blocker (ARB) recalls.
2. FDA Guidance for Industry: Development and Validation of a RapidFire–MS/MS Method for Screening of Nitrosamine Impurities.
3. FDA Guidance for Industry: LC–HRMS Method for Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs.
4. FDA Guidance for Industry: LC–HRMS Method for Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin Drug Substance and Drug Product.
5. U.S. Food and Drug Administration. Statement alerting patients and health-care professionals of nitrosamine impurities found in metformin samples.
6. Mani C., Banerjee S. Determination of Nitrosamine Impurities Using the Ultivo Triple Quadrupole LC/MS. Agilent Technologies Application Note, 2019.
7. FDA Guidance Document: LC–ESI-HRMS Method for Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin.
8. Chidella K. S., Mani C., Banerjee S., Vyas S. Simultaneous Determination of Eight Nitrosamine Impurities in Metformin Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS. Agilent Technologies Application Note, 2020.