Analysis of Thiamine Pyrophosphate and Pyridoxal-5’-phosphate in whole blood using a fully automated sample preparation LC/MS/MS system

Význam tématu

Vitamin B1 (thiamin) a vitamin B6 (pyridoxal-5’-fosfát) hrají klíčovou roli jako koenzymy v metabolických drahách člověka. Jejich přesná a spolehlivá kvantifikace v plné krvi je nezbytná pro včasnou diagnostiku deficiencí způsobených například malnutricí, onkologickou léčbou nebo jaterní a ledvinnou dysfunkcí. Automatizovaná analytika zvyšuje produktivitu klinických laboratoří a minimalizuje riziko chyb spojených s manuální přípravou vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Autoři představují vývoj a validaci plně automatizované platformy CLAM-2000 spojené s LCMS-8045 pro kvantifikaci Thiamine Pyrophosphate (TPP) a Pyridoxal-5’-phosphate (PLP) přímo z plné krve. Studie hodnotí linearitu, přesnost, opakovatelnost a vhodnost pro rutinní analýzu.

Použitá metodika

Vzorky plné krve (25 µL) byly automaticky podrobeny precipitaci, extrakci a filtraci v systému CLAM-2000 s přidáním deuterovaných interních standardů. Po oboustranně paralelní přípravě byla část extraktu (20 µL) injektována do UHPLC (Shimpack GIST C18-AQ, 30 °C) s rychlou gradientní eluční křivkou.

Použitá instrumentace

• Automatický přípravný systém CLAM-2000 (Shimadzu)
• UHPLC Nexera X2 (Shimadzu): LC-30AD pumpy, SIL-30AC autosampler, CTO-20AC kolonaový ohřívač
• Tandemové kvadrupólové MS s ESI (Shimadzu LCMS-8045)
• Kolona Shimpack GIST C18-AQ

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity měřené na 6 referenčních kalibrátorech pro obě formy vitamínů byla v rozsahu R2=0,997 a přesnost mezi 85 %–115 %. Koeficienty variability (CV) u nízké, střední a vysoké koncentrace nepřekročily akceptovatelná analytická kritéria (do 10 %). Bias se rovněž držel v rozmezí ±10 %. Systém dosahuje průtoku jednoho výsledku každých 6 minut bez nutnosti manuálních zásahů.

Přínosy a praktické využití metody

• Eliminace variability a chyb spojených s manuální přípravou vzorků
• Rychlá a spolehlivá rutina pro klinickou biochemii
• Šetření pracovních sil a zvýšení propočtu vzorků denně

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace a integrace do laboratoří nabízí prostor pro rozšíření panelu vitamínů a dalších bioindikátorů. Dále se dají optimalizovat gradientní metody pro zkrácení doby analýzy a zavést adaptivní kontroly kvality v reálném čase.

Závěr

Plně automatizovaný systém CLAM-2000 + LCMS-8045 s kit Instruchemie pro vitamíny B1 a B6 poskytuje přesnou, reprodukovatelnou a rychlou metodu pro rutinní analýzu plné krve, která výrazně zvyšuje efektivitu klinických laboratoří při minimálním riziku chyby.