Quantitative LC/MS/MS Analysis of Ethyl Glucuronide and Ethyl Sulfate using Charged Surface-C18 Column

Význam tématu

Ethylglukuronid a ethylsulfát jsou klíčové biomarkery konzumace alkoholu detekovatelné v moči dlouho po požití. Jejich vysoká polarita však ztěžuje zachycení na běžných reverzních fázích HPLC. Efektivní kvantifikace těchto metabolitů je zásadní pro forenzní, klinické i toxikologické aplikace.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo ověřit, zda hybridní nabitá povrchová C18 kolona (CS-C18) poskytuje dostatečné zadržení ethylglukuronidu a ethylsulfátu pro jejich spolehlivou detekci a kvantifikaci metodou LC/MS/MS.

Použitá metodika

Vzorky moči prošly jednoduchou přípravou „dilute and shoot“: byly naředěny 1:50 mobilní fází s formiátovou vodou a přidán interní standard. Chromatografie probíhala na CS-C18 koloně (2,1×50 mm nebo 2,1×100 mm, 2,7 µm) při 40 °C s mobilní fází A (0,01 % kyseliny formiové ve vodě) a B (methanol). Gradientní program trval 4 minuty při průtoku 0,35 mL/min.

Použitá instrumentace

• LC: Agilent 1290 Infinity II Binary Pump, Multisampler, Multicolumn Thermostat
• Kolona: Agilent Poroshell CS-C18 2,1×50 mm nebo 2,1×100 mm, 2,7 µm
• MS: Agilent 6470 LC/TQ a Ultivo LC/TQ v negativním ESI módu

Hlavní výsledky a diskuse

• Optimalizace ředění a objemu injekce: 1:50 diluce a 2 µL injekce poskytují nejlepší tvar píků a citlivost.
• Lineární rozsah: EtG 100–10 000 ng/mL, EtS 10–1 000 ng/mL (R² > 0,998, vážení 1/x).
• Stabilita metody: přes 800 injekcí zůstaly retenční časy i plochy píků konzistentní.
• Reprodukovatelnost: 1 000 injekcí pěti vzorků (200× každý) potvrdilo nízkou variabilitu i u negativního vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

Krátký analytický běh (4 min), minimální příprava vzorku a vysoká propustnost činí metodu ideální pro rutinní screening a kvantifikaci alkoholu v biomedicínských a forenzních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další výzkum může zahrnovat dlouhodobé testy životnosti CS-C18 kolony, rozšíření metody na jiné biologické matrice, plnou automatizaci přípravy vzorků a aplikaci v toxikologii či klinickém monitoringu.

Závěr

Metoda LC/MS/MS s použitím CS-C18 kolony prokazuje spolehlivou retenci, separaci a kvantifikaci ethylglukuronidu a ethylsulfátu z moči. Díky rychlosti, robustnosti a jednoduché přípravě vzorku je vhodná pro vysokopropustné rutinní analýzy.