Analysis of ethyl glucuronide and ethyl sulfate in urine with TSQ Quantis MS

Význam tématu

Ethylglukuronid (EtG) a ethylsulfát (EtS) jsou spolehlivé biomarkery konzumace etanolu díky svému delšímu poločasu než samotný alkohol. Umožňují detekovat příjem alkoholu několik dní po události, což je klíčové pro forenzní toxikologii a sledování dodržování abstinence.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní a citlivé LC–MS/MS pracovní postupy pro kvantifikaci EtG a EtS v lidské moči pomocí vysokorychlostního kapalinového chromatografu spojeného s triple kvadrupólovým hmotnostním spektrometrem Thermo Scientific TSQ Quantis.

Použitá instrumentace

• Kapalinová chromatografie: Thermo Scientific Vanquish Flex HPLC s kolonkou Phenomenex Synergi Hydro RP (100 × 3 mm, 2,5 µm)
• Hmotnostní spektrometrie: Thermo Scientific TSQ Quantis triple kvadrupól s ionizačním zdrojem HESI

Použitá metodika

• Příprava vzorku: 50 µL moče smícháno s interními standardy EtG-d5 (5000 ng/mL) a EtS-d5 (500 ng/mL), doplněno na 1000 µL vodou (20× ředění), injekce 5 µL.
• Chromatografie: mobile phase A – 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě; B – methanol; celková doba analýzy 6 min.
• MS detekce: negativní režim, časovaný SRM (t-SRM) s dvěma přechody na analyty a interní standardy, cyklový čas 0,4 s.
• Zdrojové parametry: spray voltage 2500 V (negativní), sheath gas 35 Arb, auxiliary gas 10 Arb, sweep gas 0 Arb, ion-transfer tube 350 °C, vaporizer 300 °C.
• Software pro zpracování dat: Thermo Scientific TraceFinder.

Hlavní výsledky a diskuse

• Limity kvantifikace (LOQ): EtG 100 ng/mL, EtS 10 ng/mL v autentické moči.
• Lineární kalibrace s potvrzením iontového poměru vykázala vynikající linearitu.
• Preciznost: RSD < 9,8 % pro EtG a < 4,0 % pro EtS.
• Matrixové efekty byly minimální v 17 různých šaržích lidské moči.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá metoda umožňuje rychlé (6 min) a citlivé stanovení EtG a EtS, vhodné pro rutinní i soudně toxikologické laboratoře, kde je vyžadována vysoká spolehlivost a reprodukovatelnost výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o další metabolity alkoholu pro multiplexní analýzu.
• Automatizace a vysokopropustné platformy pro zvýšení efektivity.
• Aplikace na alternativní biologické matrice (krev, vlasy).
• Integrace chemometrických přístupů a ne-cílené metabolomiky pro širší toxikologický profil.

Závěr

Platforma LC–MS/MS na bázi Thermo Scientific TSQ Quantis ve spojení s Vanquish Flex HPLC poskytuje citlivé, přesné a robustní stanovení EtG (LOQ 100 ng/mL) a EtS (LOQ 10 ng/mL) v moči, což ji činí ideální pro forenzní toxikologické aplikace.